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基于磁性纳米粒子富集、酶放大、三维网状结构等技术构建了电化学发光免疫传感器,并应用于实际样品的检测。
(1)建立了一种新型的基于酶放大、磁性纳米粒子富集的电化学发光免疫分析方法,并用于卵巢癌胚抗原CA125的分析。实验中合成了Fe3O4并将anti-CA125共价固定在其表面。通过anti-CA125/Fe3O4、CA125抗原、葡萄糖氧化酶(GOD)标记anti-CA125特异性免疫反应形成三明治免疫分析结构。通过外加磁力将其固定在磁控玻碳电极表面。线性范围为0-10 mU/mL,检测限为8.0μU/mL。本实验构建的CA125免疫传感器灵敏度高于已经报道的分析方法。实验中构建的电化学发光免疫传感器操作简单、灵敏度高,并应用于临床血清CA125的检测。
(2)构建了高灵敏检测CrylAc电化学发光免疫传感器。首先将CrylAc一抗固定在核壳型Fe3O4@Au纳米粒子表面。然后加入抗原和GOD标记的二抗特异性免疫反应形成三明治结构免疫复合物。通过电极顶部的外加磁铁将三明治免疫复合物固定到磁控玻碳电极表面。实验中构建的免疫传感器检测转基因Bt毒蛋白CrylAc的线性范围为0-6 ng/mL,检测限为0.25 pg/mL(S/N=3)。该传感器是检测CrylAc最灵敏的方法,且易更新、应用广泛。
(3)基于三维网状结构和磁性纳米粒子,构建了一种测定CA125抗原浓度的电致化学发光免疫分析新方法。luminol通过三维网状立体结构聚DTPA-乙二醇酯标记卵巢癌胚抗原(CA125)二抗,利用免疫夹心法制作载有生物活性物质的Fe3O4磁性纳米粒子,将此粒子修饰于磁控玻碳电极(GCE)表面,建立了一种检测CA125浓度的新方法,方法的线性范围为0.2-100μU/mL,检出限为0.032μU/mL。该免疫传感器制作方法快速、简单、灵敏度高、信号稳定、检测信号能够得到强效放大,并用于测定人血清中的CA125。
(4)利用层层组装技术将聚DTPA-乙二醇(PDTPA-EG)修饰到磁性纳米粒子表面。其中luminol通过PDTPA-EG标记尿微量白蛋白(mAlb)抗体。Luminol/PDTPA-EG/anti-mAlb@Fe3O4通过外加磁力修饰在磁控玻碳电极表面。然后在GOD标记的抗原溶液中反应,利用竞争法构建电化学发光免疫传感器。该传感器对mAlb在2-322pg/mL范围内成良好的线性响应,相关系数为0.9943,检测限为0.084 pg/mL。该免疫传感器线性范围宽、稳定性好,并应用于尿液中mAlb的检测。