Tim-3是重要的免疫调节分子，在肿瘤进展和免疫调节中发挥了重要作用。然而不同免疫细胞上Tim-3表达的临床意义和生物学作用还知之甚少。本研究通过临床标本检测和体内外功能研究，分析了Tim-3在胃癌免疫细胞表达的临床意义，调控机制和生物学功能。第一部分：胃癌患者NK细胞上Tim-3异常表达及临床意义目的拟通过检测胃癌患者体内免疫细胞上Tim-3的表达情况，结合临床资料分析该分子表达与胃癌进展的关系。方法收集初诊胃癌患者和健康对照组的外周血以及对应的癌组织和癌旁正常组织，流式细胞术分析Tim-3在CD56+NK细胞上表达，并结合临床资料分析该分子表达的临床意义。利用Gal-9蛋白体外激活NK，观察该分子对NK生物学功能的影响。为进一步验证临床中观测到的现象，继而开展了相应的动物学实验。首先利用胃癌细胞株MCF皮下移植瘤构建荷瘤小鼠模型，于荷瘤不同时间点，检测外周血和肿瘤组织浸润的NK上Tim-3动态表达情况。随后利用T-bet-/-基因敲除小鼠、Eomes-/-基因敲除小鼠和T-bet-/-联合Eomes-/-双基因敲除小鼠，以WT小鼠作为对照，分析核转录因子T-bet和Eomes在调控NK细胞表达Tim-3中否发挥了作用。结果无论健康对照组还是胃癌患者，在外周淋巴细胞群体中Tim-3主要表达于NK细胞而非B细胞或T细胞。扩大样本进一步分析发现，胃癌患者NK细胞上Tim-3表达则显著高于健康对照组，两者存在统计学差异。体外功能学实验证实，在rhIL-12刺激条件下，配体Gal-9(rhGal-9; Gal Pharma)激活Tim-3，可以显著促进IFN-γ分泌。动物实验表明，随着肿瘤负荷增加，外周血、脾脏和肿瘤组织中NK表达Tim-3水平均随之显著增加。表达调控分子发现，T-bet而非Eomes在NK调控Tim-3表达中发挥着关键作用。结论本研究提示NK上Tim-3在胃癌的发生发展中诱导高表达，可能是评估胃癌进展的潜在指标。第二部分：胃癌患者单核巨噬细胞表达Tim-3的临床意义及生物学功能的初步研究目的研究Tim-3在单核巨噬细胞表达、生物学功能和胃癌进展中的临床意义。方法收集初诊胃癌患者和健康对照组的外周血以及对应的癌组织和癌旁正常组织，流式细胞术分析Tim-3在CD14+单核细胞上表达，并结合临床资料分析该分子表达的临床意义。利用Tim-3阻断性抗体，CBA法分析该分子对单核细胞分泌细胞因子的影响。以Tim-3阻断性抗体，利用混合培养体系，ELISA法分析Tim-3在单核巨噬细胞介导的Th分化中的影响。为研究肿瘤负荷对单核巨噬细胞表达Tim-3的影响，利用皮下移植瘤，动态观察CD11b+F4/80+单核巨噬细胞诱导表达Tim-3。利用细胞因子和肿瘤上清添加实验，体外实验分析Tim-3在单核巨噬细胞上诱导表达调控机制。随后，利用T-bet-/-基因敲除小鼠、Eomes-/-基因敲除小鼠和T-bet-/-联合Eomes-/-双基因敲除小鼠，以WT小鼠作为对照，分析核转录因子T-bet和Eomes在调控单核巨噬细胞表达Tim-3中的作用。结果胃癌患者体内单核巨噬细胞上异常高表达Tim-3，表达水平与胃癌浸润深度和临床分期密切相关。干预Tim-3分子，可以影响单核巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12p70，然而对Th1、Th2和Th17并无显著影响。此外，动物实验和体外实验均证实肿瘤负荷是单核巨噬细胞诱导表达Tim-3的重要因素。结论肿瘤负荷可以诱导胃癌患者体内单核巨噬细胞表达Tim-3，该分子可能通过调节TNF-α等方式促进胃癌进展。