桃蛀螟嗅觉相关基因的筛选与表达谱分析

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:shohoku23
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昆虫个体间以及昆虫与环境间的交流主要依靠嗅觉和味觉来实现,其中嗅觉系统在长期的进化过程中,已经发展成为高度专一、极其灵敏的化学检测器,它能够将外界传入的化学信号转化为电信号,从而调节昆虫的行为活动,如寻找食物、觅偶、寄主、栖息场所、产卵场所以及躲避不良环境等,因此对昆虫的存活和繁殖起到重要作用。昆虫对外界气味分子的识别过程主要涉及到几种蛋白,这些蛋白包括气味结合蛋白、化学感受蛋白、气味受体蛋白和气味降解酶等。在害虫防治过程中,这些蛋白可作为新的靶标,切断任意一个环节,都可能破坏昆虫对外界气味分子的识别,从而影响其正常活动。桃蛀螟是农林生产过程中危害十分严重的一种害虫,而且寄主十分广泛,每年都会造成巨大的经济损失。目前对桃蛀螟的防治主要采取化学防治,长期、大量的使用化学农药极易引发害虫的抗药性,因此需要寻找新的防治技术,特别是生物防治技术,以持续、有效的控制桃蛀螟的危害。本文通过构建桃蛀螟触角cDNA文库,筛选出与嗅觉相关的基因,为进一步研究该基因的功能奠定了基础,并为桃蛀螟的生物防治提供了理论支持。主要研究结果如下:1.利用SMART技术构建了桃蛀螟成虫触角的cDNA文库,获得1867条ESTs序列,利用生物信息学方法筛选出28个嗅觉相关蛋白基因,其中包括11个气味结合蛋白基因,4个信息素结合蛋白基因,1个普通气味结合蛋白基因,1个触角结合蛋白基因,8个化学感受蛋白基因,3个气味受体基因。2.首次克隆了桃蛀螟气味受体蛋白基因CpunOrco的开放阅读框(ORF)全长和内参基因β-actin部分序列,GenBank登录号分别为为JX101681和JX119014。CpunOrco基因的开放阅读框全长1425bp,编码475个氨基酸,序列中有7个跨膜区。利用荧光定量PCR技术分析CpunOrco基因在桃蛀螟雌雄蛾不同组织内的表达谱,结果表明,CpunOrco基因在雌雄蛾触角、喙、下颚须、足、腹部和胸部都表达,不同组织间以及雌雄蛾的表达量存在较大差异,主要在触角和下颚须中表达,且雄蛾触角中表达量高于雌蛾触角。3.利用半定量方法分析可溶性蛋白OBP和CSP在雌雄蛾不同组织的表达情况,结果显示OBP和CSP主要在触角中表达,CpunGOBP、CpunOBP1-5、CpunOBP10在下颚须中也有一定的表达,CpunOBP3-5、CpunOBP8-11在雄蛾触角中的表达量远高于雌虫。CSP的分布范围比OBP广,CpunCSP1-2、CpunCSP5-6、CpunCSP8在雌雄蛾各部位都表达,以触角中的表达量最高。CpunCSP4、CpunCSP7在触角和下颚须中表达,并且雄蛾的表达量高于雌蛾。
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