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第一部分 Hsa＿circ＿0017639表达对胃癌增殖、转移的影响目的:初步探索hsa＿circ＿0017639在胃癌中的表达对胃癌增殖、转移的影响。方法:1.实时荧光定量 PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测hsa＿circ＿0017639在胃癌细胞系（MGC803、MKN-28、SGC7901、BGC823）和人胃粘膜上皮细胞GES-1中表达变化。2.荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测hsa＿circ＿0017639胃癌组织中的表达及亚细胞定位。3.生物信息学分析hsa＿circ＿0017639染色体定位。4.构建hsa＿circ＿0017639干扰载体（si-circ0017639）并转染 MGC803 和 MKN-28 细胞,利用 RT-qPCR 分析 hsa＿circ＿0017639的表达变化;CCK8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移能力。并利用hsa＿circ＿0017639干扰的慢病毒MKN-28稳定细胞株进行裸鼠皮下成瘤实验,然后观察干扰hsa＿circ＿0017639表达对MKN-28肿瘤生长的影响。结果:1.RT-qPCR结果显示hsa＿circ＿0017639在四种胃癌细胞系中的表达明显高于人胃粘膜上皮细胞GES-1,且差异具有统计学意义（P＜0.001）。Hsa＿circ＿0017639在MGC803和MKN-28细胞中的表达量最高。2.FISH检测显示hsa＿circ＿0017639主要定位于细胞质。3.生物信息学分析表明,hsa＿circ＿0017639由SFMBT2基因外显子环化而来,成熟的hsa＿circ＿0017639大小为536 bp。Hsa＿circ＿0017639位于染色体chr10:7290509-7327916。4.下调 hsa＿circ＿0017639 后显著抑制了 hsa＿circ＿0017639 在细胞MGC803和MKN-28中表达,差异有统计学意义（P＜0.001）;并且下调hsa＿circ＿0017639后显著抑制了 MGC803和MKN-28细胞增殖和迁移,差异均具有统计学意义（P＜0.001）。而且,体内实验证实干扰hsa＿circ＿0017639后显著抑制了MKN-28肿瘤生长。结论:Hsa＿circ＿0017639在胃癌细胞系中的表达明显升高,且在胃癌MGC803和MKN-28细胞中的表达量最高。Hsa＿circ＿0017639主要定位于细胞质。生物信息学分析表明,hsa＿circ＿0017639由SFMBT2基因外显子环化而来,大小在536 bp。Hsa＿circ＿0017639位于染色体chr10:7290509-7327916。体内、体外实验表明,干扰hsa＿circ＿0017639后可显著抑制胃癌细胞增殖、转移和肿瘤生长。第二部分 胃癌中hsa＿circ＿0017639与miR-224-5p/USP3的靶向作用关系目的:探索胃癌中hsa＿circ＿0017639下游靶点,明确hsa＿circ＿0017639与下游miR-224-5p和泛素特异性蛋白酶3（Ubiquitin-specific protease 3,USP3）之间的靶向关系。方法:1.生物信息学分析预测可能与hsa＿circ＿0017639结合的miRNAs。并预测miRNA下游靶基因。2.RNA pull down实验分析胃癌MKN-28细胞中与hsa＿circ＿0017639结合的miRNAs。3.荧光素酶报告实验验证与hsa＿circ＿0017639结合的miRNA相关通路信号分子。构建hsa＿circ＿0017639野生型（hsa＿circ＿0017639-WT）或hsa＿circ＿0017639突变型（hsa＿circ＿0017639-Mut）荧光素酶报告载体,分别和miR-224-5p模拟物（mimic）或正常对照（normal control,NC）一起转染HEK293T,利用荧光素酶报告实验检测miR-224-5p是否是hsa＿circ＿0017639的靶点。并构建USP3-3’UTR野生型（USP3 3’-UTR-WT）或U’SP3-3’UTR突变型（USP3 3’-UTR-Mut）荧光素酶报告载体,分别和miR-224-5p mimic或NC一起转染HEK293T,利用荧光素酶报告实验检测USP3是否是miR-224-5p的靶点。结果:1.生物信息学分析预测hsa＿circ＿0017639与miR-224-5p之间存在相关性,并预测miR-224-5p可靶向结合USP3。2.RNA pull down实验分析发现MKN-28细胞中miR-224-5p是唯一一个被hsa＿circ＿0017639探针大量拉下的miRNA,miR-224-5p被hsa＿circ＿0017639吸走。3.荧光素酶报告实验显示hsa＿circ＿0017639抑制hsa＿circ＿0017639-WT细胞荧光素酶活性,差异有统计学意义（P＜0.01）,但不影响hsa＿circ＿0017639-Mut 细胞的活性,表明hsa＿circ＿0017639靶向 miR-224-5p 相互作用。MiR-224-5p在USP3 3’-UTR-WT细胞中抑制荧光素酶活性,差异有统计学意义（P＜0.01）,但在USP3 3’-UTR-Mut细胞中不抑制,表明miR-224-5p靶向USP3相互作用。结论:与miRNA互作生物信息学分析及实验验证提示hsa＿circ＿0017639充当miR-224-5p的miRNA海绵,USP3是miR-224-5p的下游靶基因。提示胃癌中hsa＿circ＿0017639与miR-224-5p/USP3之间存在靶向信号通路。第三部分 Hsa＿circ＿0017639靶向miR-224-5p/USP3信号轴在胃癌增殖、转移中的调控作用目的:用功能缺失或获得实验分析hsa＿circ＿0017639与miR-224-5p/USP3相关信号通路,初步研究hsa＿circ＿0017639靶向miR-224-5p/USP3信号轴可能在胃癌增殖、转移中的调控作用。方法:1.分别用 NC、si-circ0017639、si-circ0017639+miR-224-5p 抑制剂（inhibitor）、si-circ0017639+USP3 过表达载体（USP3）转染 MGC803 和 MKN-28 细胞后,利用 RT-qPCR 分析 hsa＿circ＿0017639、miR-224-5p 和 USP3 的表达变化;平板克隆形成实验检测细胞增殖变化;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力变化。2.分别用 NC、miR-224-5p mimic、miR-224-5p mimic+USP3 过表达载体（USP3）转染MGC803和MKN-28细胞后,分别用RT-qPCR分析miR-224-5p和USP3的表达变化、平板克隆形成实验测定细胞增殖变化和transwell法测定细胞迁移能力变化。结果:1.下调hsa＿circ＿0017639后显著抑制了 hsa＿circ＿0017639表达,同时促进了 miR-224-5p表达,降低了 USP3表达。MiR-224-5p抑制剂处理后显著抑制了miR-224-5p表达,但对hsa＿circ＿0017639表达无影响;过表达USP3后对miR-224-5p和hsa＿circ＿0017639表达的表达均无影响;下调miR-224-5p或过表达USP3后USP3表达均显著增加,提示hsa＿circ＿0017639可通过靶向miR-224-5p来调控USP3表达。下调hsa＿circ＿0017639可显著抑制MGC803和MKN-28细胞增殖和迁移;而下调miR-224-5p或过表达USP3均可恢复MGC803和MKN-28细胞的增殖和迁移能力。2.用 miR-224-5p mimic 过表达 miR-224-5p 后,miR-224-5p 的表达增加,USP3 表达减少;过表达USP3后,miR-224-5p的表达没有恢复,USP3表达显著增加。过表达miR-224-5p,MGC803和MKN-28细胞的增殖和迁移能力均下降;过表达USP3可逆转miR-224-5p诱导的细胞增殖和迁移抑制;且过表达USP3促进胃癌细胞的增殖和迁移。结论:功能缺失或获得实验提示miR-224-5p和USP3在hsa＿circ＿0017639的下游,USP3 位于 miR-224-5p 的下游。提示 hsa＿circ＿0017639 通过靶向 miR-224-5p/USP3信号轴调控胃癌增殖和转移。