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目的:探讨静压力对聚乳酸-乙醇酸聚合物(PLGA)上人牙龈成纤维细胞(HGFs)中Rho A/ROCK通路及F-肌动蛋白(F-actin)表达的影响,以进一步了解Rho A/ROCK信号通路与细胞骨架在HGFs力学响应机制中的作用。方法:1、用组织块培养法进行HGFs的原代培养并鉴定细胞来源,建立HGFs系。2、将第4-6代的HGFs悬液接种于PLGA支架上,构建HGFs-PLGA三维培养模型。3、采用重物加载模型,对三维培养的HGFs施加25g/cm~2的静压力,作用时间分别为0、6、24、48、72小时。采用RT-qPCR技术与Western blot技术检测三维培养的HGFs中Rho A和ROCK的mRNA与蛋白表达变化情况。4、采用罗丹明标记的鬼笔环肽对HGFs F-actin进行特异性染色,联合激光扫描共聚焦显微镜观察静压力作用下HGFs中F-actin的变化特征。结果:1、采用组织块培养法培养出的原代细胞,经进行细胞的形态学观察与免疫来源鉴定,证实为HGFs。2、第4-6代HGFs性状稳定,接种于PLGA支架后,经激光扫描共聚焦显微镜观察,细胞能依附于PLGA支架上呈三维方向密集生长,细胞形态学正常。3、当对HGFs-PLGA施加25 g/cm~2的静压力后,Rho A的mRNA表达在24小时内上调,ROCK的mRNA表达量在48小时内上调,二者均在6小时表达量达到峰值;在加力的48小时内,ROCK的mRNA表达量高于Rho A的mRNA表达量。随着力作用时间延长,二者的mRNA表达量均逐渐恢复至未加力(0h)水平。4、当对HGFs-PLGA施加25g/cm~2的静压力后,Rho A蛋白在48小时内表达量逐渐上调,在24小时表达量最高;ROCK蛋白在72小时内表达量均上调,在24小时表达量达到最高。随着加力时间延长,72小时Rho A蛋白表达量已逐渐恢复至未加力水平,ROCK蛋白表达量也开始回落,但仍高于未加力组。5、不加力时,HGFs排列紊乱,细胞F-actin纤维沿细胞长轴排列,形态较纤细,多聚集在细胞边缘,分布在细胞核周围的较少。当对HGFs-PLGA施加25g/cm~2的静压力6小时后,细胞排列变整齐,HGFs骨架重塑,F-actin的平均荧光强度增加,F-actin聚合,形成应力纤维,开始在细胞两端和细胞核周围聚集。加力24小时后,细胞排列更加整齐,排列在细胞核周围的应力纤维进一步增加,胞质内的应力纤维致密而均匀。加力48小时后,细胞排列方向朝未加力水平恢复;F-actin平均荧光强度开始下降,但仍比未加力组平均荧光强度高;同时,应力纤维开始减少、变细,排列方向性减弱。结论:1、HGFs与PLGA支架共培养后二者显示良好的生物相容性,可成功构建HGFs-PLGA三维培养模型。2、机械力信号作用下HGFs Rho A和ROCK基因与蛋白表达均上调,Rho A/ROCK信号通路被激活。3、机械力能诱导HGFs细胞骨架重塑,形成应力纤维,从而参与机械力的信号传导。