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目的:探讨益气活血法对缺血性脑卒中神经细胞凋亡过程中线粒体损伤及CytC释放水平的影响。
方法:应用大脑中动脉线栓阻断法建立SD大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)。将健康雄性SD大鼠48只随机分为假手术组、模型组、益气活血方组、尼莫地平组,各用药组灌胃剂量按体型系数计算,连续给药5天,每天1次,假手术组、模型组灌胃等容积生理盐水。缺血2h,再灌注6h后,按longa评分标准进行评分。各实验组随机选每8只大鼠灌注固定后取脑组织待做石蜡切片,HE染色,镜下观察脑组织病理损伤情况;运用免疫组化SABC法检测CytC蛋白表达情况;剩余各实验组每组4只直接取新鲜脑组织后,液氮冻存待做冰冻切片,采用免疫荧光组织化学方法观测线粒体变化。
结果:①各造模组实验动物呈现不同程度的神经缺损,评分显示,以模型组偏瘫症状明显,益气活血方组、尼莫地平组对神经缺损症状有所改善(P<0.05);②脑组织病理学观察结果显示,益气活血方组、尼莫地平组神经元损伤程度较模型组有明显减轻;③模型组大鼠CytC蛋白表达明显增强,益气活血方组、尼莫地平组则表达有所减少,有显著的统计学意义(P<0.05);④益气活血方组线粒体阳性表达较强,与尼莫地平组及模型组比较有显著的统计学意义(P<0.05)。
结论:益气活血法能显著改善局灶性脑缺血再灌注大鼠神经体征,减轻脑组织病理损伤程度,其作用可能是通过干预线粒体介导的细胞凋亡的发生途径,减少诱导凋亡蛋白CytC的表达,从而抑制神经细胞凋亡。