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目的:探讨在胶质瘤中调控Semaphorin3c表达调控机制。方法:1、生物信息学软件分析和预测可能调控Sema3C表达的microRNA:(1)GeneBank中输入Sema3C基因,找出该基因mRNA的3’UTR序列。(2)采用TargetScan和miRanDa软件,将Sema3C mRNA的3’UTR序列输入其中,评分选择可能调控Sema3C表达的5-10个候选microRNA。(3)通过PubMed软件进行文献检索,在2中选择的5-10个候选microRNA中进一步缩小范围,将待检测目的microRNA缩小至2-3个。2、检测microRNA对Sema3C表达的调控:(1)订制针对人microRNA的模拟物(mimics)和抑制剂。(2)体外常规培养人胶质瘤细胞系(A172和U251),采用Lipotamine2000转染法将目的microRNA的模拟物(mimics)和抑制剂,及其相应的对照(模拟物对照和抑制剂对照)分别转染入以上细胞系,提取总蛋白和总RNA,Westernblot和荧光定量PCR法检测Sema3C的表达。3、检测待选microRNA是否可影响Sema3C mRNA的3’UTR的活性:(1)提取人胶质瘤细胞系A172的总RNA,进行cDNA的反转录,扩增软件中预测出可能有microRNA结合的序列,将其连接到pmirGLo质粒上。(2)将microRNA的模拟物和抑制剂及其对照、含有Sema3C mRNA的3’UTR的pmirGLo载体等分别转染入HEK293T细胞中,对细胞样品进行裂解后检测各组荧光信号值。4、收集胶质瘤组织(约30例)和周边正常脑组织(约30例)后,进行如下实验:(1)提取组织总RNA和总蛋白,Western blot和实时荧光定量PCR法检测Sema3C和microRNA的表达。(2)统计学分析Sema3C和microRNA的表达在胶质瘤和周边癌组织中是否存在相关性。结果:1、Sema3C的组织学表达特点免疫组织化学法检测发现Sema3C在胶质瘤中的过表达的频率(78.2%)明显高于周边正常组织(20.0%);低表达Sema3C的胶质瘤患者预后较好(p=0.017);临床指标分析发现,其表达量与组织学分型(p=0.008)和病理分级(p=0.002)相关;在Sema3C表达量较高的组织中IDH1(可溶性异柠檬酸脱氢酶1)突变的发生率低(p=0.0001);此外,还与Ki67指数相关(p=0.02)。2、Sema3C的细胞学功能沉默Sema3C表达后,细胞的增殖和侵袭能力明显降低;对增殖能力的调控是通过影响细胞周期实现的;Sema3C可通过改变细胞的上皮-间质转换影响细胞的侵袭能力等。3、Sema3C致病机制的研究Sema3C在胶质瘤细胞中受mi R-142-5p的表达调控,miR-142-5p是通过影响Sema3C m RNA的翻译水平实现的;miR-142-5p也可调控胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,并且该作用的发挥也可能通过影响细胞的上皮-间质细胞转化而发生。4、Sema3C和miR-142-5p组织表达相关性miR-142-5p在胶质瘤组织的表达随着级别的升高而降低;Sema3C和miR-142-5p在胶质瘤组织中的表达成负相关。结论:1、Sema3C在胶质瘤中可作为不良预后指标用于临床诊断方面的继续研究;2、Sema3C在胶质瘤中发挥癌基因的作用,该作用的发挥可能通过调控上皮-间质细胞转化而实现;3、miR-142-5p在胶质瘤中负向调控Sema3C的表达,提示在胶质瘤病变过程中可能存在miR-142-5p/Sema3C致病途径。