平邑甜茶MhMAPK基因的分离、功能鉴定及其信号转导作用

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促分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase , MAPK)是MAPK级联信号转导途径中的关键酶,在植物生长发育和胁迫信号传递中起重要作用。平邑甜茶(Malus hupehensis (Pamp) Rehd. var pinyiensis Jiang)是苹果常用砧木,本文以平邑甜茶为试材,克隆了MAPK基因全长、分析了其基因序列与编码蛋白,还研究了胁迫下MAPK基因表达与蛋白活性,主要结果如下:1.利用RT-PCR技术结合RACE技术获得了平邑甜茶MAPK基因,命名为MhMAPK。GenBank注册号为EF427897。2. MhMAPK编码的蛋白质特性分析表明,该蛋白具有MAPK蛋白的典型结构,即含有11个保守的蛋白激酶亚区,在第Ⅶ和第Ⅷ个亚区之间有一个非常保守的TxY基序,并且含有蛋白激酶所具有的结构域。3.构建了pBIN-GFP-MhMAPK表达载体并使其在洋葱表皮中表达,结果表明,MhMAPK定位在细胞核内,同时利用ProtComp Version 6.1软件分析的结果也表明该蛋白定位于细胞核内。4.构建了pBI121-MhMAPK正义表达载体并转化农杆菌LBA4404,并对烟草进行了农杆菌侵染,获得了转基因烟草植株。此外,还构建了pBI121-3’segment反义表达载体,从而为转反义基因提供了基础。5.盐胁迫、干旱胁迫、CdCl2和CuCl2胁迫以及SNP (NO供体)均能显著提高MhMAPK基因的表达量,并且SNP,CdCl2和CuCl2均能增加平邑甜茶中MAPK活性,同时,在CdCl2和CuCl2胁迫过程中,检测到NO的产生,这表明在铜、镉胁迫过程中,NO可能作为信使分子在铜,镉胁迫下起着信号传递的作用,并且NO激活的MAPK级联途径起着重要作用。
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