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目的：
(1)构建出E2F1启动子调控HGFK1基因的重组腺病毒，为肝癌的药物治疗提供一些新的思路及方法途径。
(2)本研究将为下一步进行该重组腺病毒的生物学功能研究打下基础。方法：
1．E2F1启动子基因的克隆与重组克隆载体的构建及鉴定
由HepG2细胞提取总RNA，行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获E2F1启动子cDNA，与pGEM-TEasyVector连接，构建重组克隆载体pGEM-TEasy-E2F1。重组克隆载体以CaCl2法转化E．ColiDH5α并行氨苄青霉素筛选，采用菌落直接PCR、XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切及序列分析等方法，证实目的片段的存在和序列正确。
2．重组腺病毒穿梭载体pDC316-HGFK1和pDC316-E2F1-HGFK1的构建与鉴定
(1)本实验室保存的pGEM-TEasy-HGFK1的E.ColiDH5α增菌后，提取重组载体pGEM-TEasy-HGFK1行SmaⅠ和HindⅢ双酶切，电泳胶回收目的片段并测定浓度，与经相同双酶切的载体pDC316提取物连接成重组腺病毒穿梭质粒pDC316-HGFK1。
(2)将转化重组克隆载体pGEM-TEasy-E2F1的E.ColiDH5α增菌后，提取重组载体pGEM-TEasy-E2F1行XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切，电泳胶回收目的片段并测定浓度，与经相同双酶切的载体pDC316-HGFK1提取物连接成重组腺病毒穿梭质粒pDC316-E2F1-HGFK1。将重组表达载体转化到E.ColiDH5α并行氨苄青霉素(200μ,g/ml)筛选，经菌落PCR、XbaⅠ和HindⅢ双酶切等方法确定目标片段的存在和序列正确。
3．细胞转染与阳性克隆的鉴定
采用脂质体转染法行重组腺病毒穿梭载体的转染。以仅加脂质体MHCC97细胞为空白对照，空载体pDC316转染后MHCC97细胞为阴性对照，载体pDC316-HGFK1及载体pDC316-E2F1-HGFK1阳性对照。37℃、5％CO2静置培养48h后，消化细胞提取总RNA，RT-PCR，电泳，检测HGFK1基因的存在以确定成功转染。
结论
HGFK1基因获成功克隆并构建了重组腺病毒穿梭载体pDC316-HGFK1和pDC316-E2F1-HGFK1。转染HGFK1基因后的MHCC97细胞经RT-PCR发现存在特异性DNA片段。HGFK1基因在MHCC97细胞中可表达HGFK1mRNA和蛋白。上述结果将有助于深入研究HGFK1的生物学效应及对肝癌进行基因治疗的探索。