恩拉霉素(enramycin)由不饱和脂肪酸与17种氨基酸结合的多肽类抗生素,主要成分为恩拉霉素A和恩拉霉素B。它因具有广谱抗菌活性、毒性小、低残留和稳定性高等优点而常作为饲料添加剂被广泛应用在禽畜养殖中。本文考察了不同氧载体对恩拉霉素表达的影响,同时研究了影响恩拉霉素稳定性的因素,并对恩拉霉素微乳剂进行了初步研究。首先对多种氧载体对恩拉霉素表达的影响进行比较,结果表明,正十六烷对恩拉霉素发酵体系中表达的效果最好。接着对正十六烷添加量和添加时间进一步优化。通过单因素试验和响应面优化得到了正十六烷添加的最佳方式:正十六烷的最优添加时间为43.30 h,最优添加量为0.72%。采用该添加方式开展恩拉霉素发酵,生产菌菌浓较对照提高23%,发酵液中恩拉霉素的含量达到2950.78 mg/L,与理论预测值的相对误差在0.48%,较对照提高70%。因此,添加正十六烷能加强发酵液中氧传递,提高溶氧水平,从而促进菌体生长及恩拉霉素合成。由于多肽特殊的分子结构,导致了多肽类药物的不稳定性。本文从温度、光照两方面考察了其对恩拉霉素制剂稳定性的影响。热稳定性试验结果表明,恩拉霉素预混剂在4℃～25℃范围内,在设定的保存之间内稳定。再提高贮藏温度,恩拉霉素预混剂和原料药都表现出不稳定性。54℃保存16天后,恩拉霉素预混剂含量只有58.38%。此外,还进行极限温度对恩拉霉素预混剂和原料药的影响实验。结果表明,100℃的极限条件下加热2 h,恩拉霉素预混剂及恩拉霉素原料药中恩拉霉素含量分别损失了 50.42%和32.23%。光稳定试验结果表明,将恩拉霉素预混剂直接曝露于15 w紫外灯下24 h,其中恩拉霉素含量损失接近40%;曝露于光照强度为4500 lx±500 lx的日光灯下15 d,其中恩拉霉素含量损失25.65%。并且相较于恩拉霉素A组份,恩拉霉素B组份对热、对光更加不稳定。因此,恩拉霉素在贮藏过程中需要避光,并且在25℃以下贮藏。本文在考察了现有恩拉霉素制剂稳定性的基础上,开展了恩拉霉素微乳剂型的研究。在恩拉霉素原料药在不同辅料中溶解情况的基础上,确定恩拉霉素微乳剂的辅料考察对象,以油酸乙酯(EO)、肉豆蔻酸异丙酯(IPM)、中链甘油三酯(MCT)为油相,Tween-80、Tween-20、聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40)作为表面活性剂,以PEG400、乙醇和1,2-丙二醇作为助表面活性剂,进行三相配伍试验。通过配伍实验、绘制伪三相元图初步确定了 3种空白微乳剂配方。之后通过各微乳剂配方的最大载药量、乳滴粒径、以及离心稳定性等方面进一步考察,确定出最优的配方。在该配方下,恩拉霉素载药量为3.5%,平均粒径为50 nm。以含SDS的水为释放介质,恩拉霉素微乳剂10 min内可以达到66.20%的释放量。恩拉霉素微乳剂的稳定性试验结果表明该制剂在高速、低速离心、低温、高温热贮的试验条件下,没有发生明显的外观变化。从药物含量来看,恩拉霉素微乳剂在低温条件下存贮7天后,药物含量保持在94%以上,热贮7天后药物含量保持在95%以上,稳定性良好。体外抑菌试验结果表明恩拉霉素微乳剂保持了良好的抑菌活性。且恩拉霉素微乳剂显著提高了恩拉霉素的溶解度。