短时高温对绿豆象生长发育及热激蛋白Hsp70基因表达的影响

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绿豆象(Callosobruchus chinensis L.)是一种为害绿豆、豇豆、红豆等豆类作物的世界性分布害虫。为探明绿豆象对高温胁迫的响应机制,利用温度等级器对绿豆象的温度选择性进行了测定,探究了短时高温处理对绿豆象各虫态生长发育的影响,并且对短时高温处理下绿豆象成虫热激蛋白Hsp70基因的相对表达量进行了测定。主要研究结果如下:1.利用温度等级器对4种初始温度下绿豆象的温度选择性进行了测定。结果表明,初始温度大于39℃时绿豆象趋向于低温区,而45℃温区中的绿豆象有明显的躲避行为;绿豆象雌雄虫的选择温度下限分别为30.2℃和29.8℃,选择温度上限雌虫高于雄虫,分别为38.2℃和37.0℃。2.对6种温度条件下不同虫态的绿豆象进行了3 h的短时高温处理。结果表明,短时高温处理3 h对绿豆象卵的孵化率、幼虫化蛹率和蛹的羽化率有显著影响,但对卵和幼虫的后续发育影响不显著;幼虫经短时高温处理后化蛹率均在90%以上;蛹在45℃短时高温处理后虽表现出较高的羽化率,但羽化后成虫的寿命及产卵量均显著降低。卵期、幼虫期和成虫期绿豆象对短时高温的耐受性均有性别差异,其中,卵期和蛹期雄虫耐热性强于雌虫,成虫期雌虫强于雄虫。短时高温处理对绿豆象成虫的产卵量具有不利影响,经45℃处理后成虫的产卵量为32.30粒/头,显著低于对照。3.以6种温度下高温处理3 h的绿豆象雌雄虫为研究对象,利用q RT-PCR技术,检测了β-actin(β-肌动蛋白)、α-tubulin(α-微管蛋白)、EF1-α(α-延伸因子)、GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)、Hsc70(组成型热激蛋白70)、AK(精氨酸激酶)、rsp L-40(核糖体蛋白)和β-tubulin(β-微管蛋白)等8个候选内参基因m RNA的表达情况。经ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3款软件对各候选内参基因进行表达稳定性计算,综合分析确定β-tubulin是用于热胁迫条件下绿豆象q RT-PCR反应的最适内参基因。4.以β-tubulin为内参基因,对经6种温度处理1 h、3 h的绿豆象雌雄成虫的Hsp70基因进行q RT-PCR分析。结果表明,处理1 h时绿豆象Hsp70基因的相对表达量显著上升,而当处理时间延长至3 h后其表达水平明显下调;经1 h短时高温处理后雄虫Hsp70基因表达量在42℃时最大,为对照的25.94倍,雌虫表达量在45℃时最大,为对照的27.59倍;而经3 h短时高温处理后的相对表达量最高仅为对照的3.19倍,且与对照及其他各处理组差异不显著。
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