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食源性致病菌是引起食源性疾病的重要原因,是食品安全的重大隐患。因此对致病菌进行快速有效的检测就显得尤为重要。传统的检测方法(如分离培养和生化鉴定等)对致病菌检测的特异性不高、灵敏度低及操作繁琐耗时,不能实现快速检测。近年来,酶底物的合成和应用发展迅速,已经广泛用于微生物检测,但是要将该方法作为日常检测方法成本较高。因此迫切需要开发出简单易行的合成工艺,以降低酶底物的生产成本。6-氯-4-甲基-7-羟基香豆素-β-D-葡糖苷酸在酶活性测试方面具有很高的应用价值。本论文对6-氯-4-甲基-7-羟基香豆素-β-D-葡糖苷酸的合成进行了研究。以廉价的4-氯-间-苯二酚为起始原料,经过改良Pechman缩合反应得到荧光团,以Koenigs-Knorr糖苷化反应为关键步骤,脱除乙酰基、甲酯得到目标酶底物。本实验开发了一种简单实用的6-氯-4-甲基-7-羟基香豆素-β-D-葡糖苷酸合成方案。与此同时,我们通过在香豆素的甲基上引入氟原子对原有的荧光团进行改性,设计合成了6-氯-4-三氟甲基-7-羟基香豆素-β-D-葡醛酸甲酯糖苷。传统荧光素的羧基可以替换为甲基,β-葡醛酸糖苷酶底物的特异性比β-半乳糖苷酶底物的特异性高。本论文对荧光素-β-D-葡醛酸甲酯糖苷的合成进行了研究。以全乙酰化的葡醛酸甲酯为起始原料,经过溴代、Koenigs-Knorr糖苷化以及乙酰基的脱除,合成了荧光素-β-D-葡醛酸甲酯糖苷。之后基于同样的方法,合成了2,6-二氯-4-乙酰基苯酚-β-D-葡醛酸甲酯糖苷,并对2,6-二氯-4-乙酰基苯酚的p Ka进行了测定,初步确定2,6-二氯-4-乙酰基苯酚-β-D-葡醛酸甲酯糖苷有望替代6-氯-4-甲基-7-羟基香豆素-β-D-葡糖苷酸成为新一代酶活性测试底物。荧光团的红移和一定程度的斯托克斯位移有助于生物成像研究。本论文通过共轭体系的扩展设计合成了一种丙二腈异黄酮酶底物,为之后的生物活性测试鉴定基础。以邻羟基苯乙酮为起始原料,经过溴代反应、Aldol反应、4位丙二腈的引入、Koenigs-Knorr糖苷化反应、Knoevenagel缩合反应以及乙酰基的脱除反应,合成了2-(2-(4-羟基苯乙烯基)-4H-苯并吡喃-4-亚甲基)丙二腈-β-D-葡醛酸甲酯糖苷。本论文评估了4-甲基-7-羟基香豆素-β-D-葡糖苷酸(4-MUG)、6-氯-4-甲基-7-羟基香豆素-β-葡醛酸甲酯糖苷(6-CMUG甲酯)以及6-氯-4-甲基-7-羟基香豆素-β-D-葡糖苷酸(6-CMUG钠盐)在快速检测水中大肠杆菌活性方面的潜力。通过对比市售的4-MUG和合成的6-CMUG甲酯、6-CMUG钠盐的光谱性质以及酶学性质,结果表明合成的两个底物有望替代市售的4-MUG成为新一代微生物活性测试的特异性底物。