论文部分内容阅读
目的:构建KM小鼠HBx(Hepatitis B virus X)表达模型,探讨HBx对正常免疫功能小鼠肝脏细胞凋亡和周期的影响及其机制。方法:观察肝前体细胞株(hepatic progenitor cells,HPCs)中慢病毒的转染情况,qRT-PCR和Western blotting方法检测HBx在肝前体细胞中的表达;将表达HBx的肝前体细胞经肝门静脉注射到KM小鼠体内建立动物模型,于手术后60天、90天和120天观察小鼠肝脏组织中EGFP的表达,使用qRT-PCR、Western blotting和免疫组化的方法检测小鼠肝脏组织中HBx的表达;检测小鼠肝脏细胞凋亡和周期相关因子以及Akt/mTOR信号通路因子的mRNA和蛋白表达水平;采用TUNEL-FITC/DAPI方法检测小鼠肝脏细胞的凋亡率。结果:HBx-EGFP-14-19组小鼠肝脏细胞的凋亡率显著降低,促凋亡因子caspase-9和Bad的mRNA和蛋白表达均下调,而抗凋亡因子Bcl-xl的mRNA和蛋白表达上调;CDK2、cyclinD1和cyclinE的mRNA表达水平较对照组上调,CDK2、cyclinD1、cyclinE、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达较对照组上调;给予携带HBx的小鼠Akt磷酸化抑制剂MK-2206可显著扭转HBx对上述小鼠肝脏细胞凋亡和周期调控因子的影响。结论:HBx在体内激活Akt/mTOR信号通路抑制小鼠肝脏细胞的凋亡并上调细胞周期调控因子的表达。