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背景:黑色素瘤具有高转移性,是皮肤癌中死亡率最高的癌症,其发病率在过去的数十年中稳步增加,对世界医疗体系构成了很大的挑战。虽然早期的黑色素瘤病人能够通过手术切除和放化疗达到良好的预后疗效,但是晚期的黑色素瘤患者死亡率仍然较高。尽管目前在黑色素瘤治疗的靶向药物研究中取得了一定的进展,但是耐药性非常普遍。因此,进一步探索潜在的治疗靶点,开辟新的治疗策略至关重要。Ebp1被鉴定为Erb B3受体结合蛋白1,由PA2G4基因编码,在细胞核和细胞质中普遍表达和定位。Ebp1是一种细胞周期相关蛋白。研究表明,Ebp1在细胞增殖和分化中起着多种重要作用。据报道Ebp1在胶质母细胞瘤、肝细胞肝癌和急性白血病等多种肿瘤中的表达升高,且高表达的Ebp1与患者的预后不良密切相关。然而,Ebp1在黑色素瘤中的作用研究尚未见报道。因此,探索Ebp1在黑色素瘤中的生物学作用对于研发治疗黑色素瘤的靶向药物具有重要意义。目的:本研究主要分析Ebp1在黑色素瘤发生发展中的作用及其可能的作用机制,明确Ebp1对黑色素瘤患者临床特征及预后情况的影响,为探索黑色素瘤的潜在治疗靶点提供新的依据。方法:第一部分:（1）比较TCGA、GTEx和GEO数据库中Ebp1在黑色素瘤及相应的正常组织中的表达情况。（2）采用免疫组织化学染色观察Ebp1在黑色素瘤组织中的表达。（3）根据TCGA数据库中黑色素瘤患者的临床资料,分析Ebp1与黑色素瘤患者的临床特征及预后的关系。第二部分:（1）利用慢病毒载体构建稳定的Ebp1低表达的A375和B16细胞系,采用CCK-8法、平板克隆实验、软琼脂克隆形成实验和细胞周期测定了Ebp1对黑色素瘤细胞增殖的影响。（2）通过划痕实验和Transwell实验分析Ebp1对黑色素瘤细胞迁移的影响。（3）使用A375sh NC和sh Ebp1细胞系构建裸鼠成瘤模型,并通过免疫组织化学染色检测瘤体中Ebp1的表达,分析Ebp1对裸鼠体内成瘤能力的影响。（4）使用B16sh NC和sh Ebp1细胞系构建裸鼠体内肺转移模型,通过H＆E染色观察体内肺转移的情况,研究Ebp1对黑色素瘤细胞体内转移能力的影响。第三部分:（1）通过GSEA富集分析及GEPIA在线网站预测Ebp1与EMT相关蛋白的表达相关性。（2）利用Western blot检测A375sh NC、A375sh Ebp1、B16sh NC和B16sh Ebp1细胞中EMT相关蛋白的表达水平,同时通过细胞免疫荧光实验进一步验证。（3）通过GEPIA在线网站预测Ebp1与Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达相关性。（4）使用Western blot检测A375sh NC、A375sh Ebp1、B16sh NC和B16sh Ebp1细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。（5）在A375sh Ebp1以及B16sh Ebp1细胞培养基中加入Wnt信号通路激活剂,检测加入激活剂后对EMT及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果:第一部分:（1）TCGA及GTEx数据库显示,Ebp1在黑色素瘤组织中的表达明显高于正常皮肤组织（P=7.8e-14）。（2）通过挖掘GEO数据库,在GSE15605基因集中观察到Ebp1在黑色素瘤组织中的表达明显高于正常皮肤组织（P=0.0144）。（3）通过免疫组织化学染色的结果观察到Ebp1在黑色素瘤组织中高表达。（4）Ebp1高表达的黑色素瘤患者中男性患者、T4期患者以及复发患者所占的百分比较高。（5）Ebp1高表达的患者总生存期低于Ebp1低表达的患者。第二部分:（1）CCK-8实验、平板克隆集落形成实验以及软琼脂集落形成实验观察到敲低Ebp1的表达降低了A375和B16细胞的生长活力以及增殖能力。（2）细胞周期显示,敲低Ebp1的表达使A375和B16在G1期发生细胞阻滞,抑制了A375和B16细胞的增殖。（3）划痕实验和Transwell实验表明,敲低Ebp1的表达降低了A375和B16细胞的迁移能力。（4）裸鼠体内成瘤实验观察到敲低Ebp1的表达抑制了裸鼠体内皮下瘤体的生长。（5）裸鼠体内肺转移实验结果表明Ebp1的敲低抑制了黑色素瘤细胞体内肺转移能力。第三部分:（1）通过GSEA富集分析及GEPIA在线网站分析得出Ebp1的表达与EMT相关蛋白的表达呈正相关。（2）A375和B16细胞中Ebp1的敲低使Vimentin,N-cadherin,Slug和Snail的蛋白表达降低,同时也增加了E-cadherin的表达。（3）免疫荧光实验显示Ebp1敲低后A375和B16细胞中Vimentin的表达降低,E-cadherin的表达升高。（4）GEPIA在线网站分析得出Ebp1的表达与β-catenin、GSK3β和Cyclin D1的表达呈正相关。（5）Western blot实验结果表明,敲低Ebp1后β-catenin、p-GSK3β和Cyclin D1的蛋白表达下降。加入Wnt/β-catenin信号通路激活剂后,由Ebp1敲低引起的蛋白改变结果被逆转。结论:1.Ebp1在黑色素瘤组织中高表达,其表达水平与黑色素瘤患者的预后不良呈正相关,并有可能成为黑色素瘤患者的预后标志物。2.Ebp1能够增强黑色素瘤细胞的增殖和转移能力。3.Ebp1通过Wnt/β-catenin信号通路调控EMT从而促进黑色素瘤细胞的侵袭和转移。