【摘 要】
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目的:发展一种集成式微流控芯片PCR阵列系统,用于资源有限环境下的多重呼吸道感染病原快速检测。方法:研究设计并加工了一种包含仪器与微流控芯片的PCR阵列系统,集成了样本裂解、核酸提取/纯化、扩增/检测功能。微流控芯片通过六个隔膜阀控制流体通路的开放与闭合,以确保流体在芯片内程序性地流动,因而顺序完成一系列分析步骤。核酸PCR扩增在预装载引物和探针的32阵列微反应室中完成,可同时检测21种呼吸道感染
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目的:发展一种集成式微流控芯片PCR阵列系统,用于资源有限环境下的多重呼吸道感染病原快速检测。方法:研究设计并加工了一种包含仪器与微流控芯片的PCR阵列系统,集成了样本裂解、核酸提取/纯化、扩增/检测功能。微流控芯片通过六个隔膜阀控制流体通路的开放与闭合,以确保流体在芯片内程序性地流动,因而顺序完成一系列分析步骤。核酸PCR扩增在预装载引物和探针的32阵列微反应室中完成,可同时检测21种呼吸道感染病原及内质控（RNase P基因）。扩增荧光信号被仪器实时采集,依据Ct值判定检测结果。研究通过标准样品分析确定了芯片法的检出限、重现性以及特异性,并通过批量临床样本检测对该芯片系统的临床应用价值进行了考察。结果:该微流控芯片系统能够以完全集成的方式在1.5小时内完成多重呼吸道病原检测。研究通过检测系列稀释阳性对照品确认了芯片法的检出限,基于Probit回归分析（P>0.05）计算出各靶标的检出限均在1.0×103 copies·m L-1水平。对各靶标的阳性对照品进行重复检测,实验结果显示芯片法对各病原体检测的Ct值批间相对标准偏差为0.08%-0.69%,批内相对标准偏差为0.9%-2.66%。对多种病原体混合的阳性参考品进行分析,结果显示各病原体之间无交叉影响,芯片法的检测特异性为100%。批量临床样本检测结果显示芯片法与传统的实时荧光PCR法具有一致性。结论:研究发展的微流控芯片多重呼吸道感染病原体检测方法具有操作简便、通量适宜和分析快速的特点和优势,是资源有限环境下实现病原体快速检测的有力工具。
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