IgA肾病作为目前世界范围内最常见的原发性肾小球疾病之一,发病率存在显著地区差异,以亚洲地区高发。该病的临床表现主要为不同程度蛋白尿,可伴反复发作性肉眼血尿或镜下血尿。肾脏免疫病理以看到IgA或以IgA为主的免疫球蛋白在系膜区沉积,以及系膜细胞增生,系膜基质增加,伴或不伴毛细血管袢沉积为主。约30%～40%的患者在20年内进展至终末期肾病,是造成慢性肾衰竭的主要原发性肾小球疾病,给患者和社会都带来了巨大的负担。激素与支持治疗虽然在一定程度上可减轻IgA肾病患者的蛋白尿,但并未显示出减缓肾功能进展的作用,且均有不良事件发生。因此寻求联合中药治疗十分必要,在降低患者蛋白尿的同时延缓肾功能进展,减少不良事件发生,有重要的科学价值和社会意义。随着单靶点药物研究的弊端逐渐显露,多靶点药物的研究逐渐兴起,“网络药理学”一词被提出,并广泛应用于科研研究,在疾病致病机制方面有了新的突破,也给新药的研发带来了有效的研究手段,应用网络药理学研究中药及其复方也成为了当下众多的研究热点之一。本研究基于前期网络药理学相关方法研究的结果,选定IL-17信号通路,进一步探讨加味黄芪赤风汤对IgA肾病的作用机制。目的:基于IL-17信号通路,研究加味黄芪赤风汤对IgA肾病大鼠蛋白尿的疗效及对其肾脏病理损伤的改善作用,探讨该方治疗IgA肾病的分子机制。方法:采用牛血清蛋白+四氯化碳+脂多糖方法构建IgA肾病大鼠模型,于第13周鉴定造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠以随机数字表的方法分为模型组、替米沙坦组、加味黄芪赤风汤高、中、低剂量组,每组各10只。应用替米沙坦、加味黄芪赤风汤干预8周,实验共21周。每3周收集一次大鼠的24h尿液,并检测相关24h尿蛋白定量。实验结束时取大鼠腹主动脉血液,检测大鼠血清中相关血生化水平,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠血清IL-6、IL-17A水平。取血后剥离大鼠双侧肾脏,分别采用HE、Masson和PAS染色法对各组大鼠肾脏切片进行染色,采用光学显微镜观察大鼠肾脏的病理改变,免疫荧光显微镜观察大鼠肾脏IgA沉积情况,透射电镜观察肾小球超微结构的改变。取新鲜肾脏组织部分肾皮质,石蜡包埋,免疫组化法检测IL-17信号通路上的关键靶点HSP90、MMP9、NF-κB P65、p-NF-κB P65相关蛋白的表达水平,Western Blot 法检测 HSP90、MMP9、NF-κB P65、p-NF-κB P65 相关蛋白的表达水平。结果:1.大鼠24h尿蛋白定量检测:在造模阶段,自第9周起,造模组大鼠的24h尿蛋白定量与空白组相比明显增多（P＜0.05）;在药物干预阶段,第21周检测替米沙坦组和中药各剂量干预组大鼠的24h尿蛋白定量与模型组相比均有所降低（P＜0.05）;中药各干预组大鼠24h尿蛋白定量下降程度与替米沙坦组相比,无明显统计学差异（均P＞0.05）。2.实验结束后检测大鼠血生化相关指标,各组血清肌酐（Scr）、血清白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平相互比较,均无统计学差异（P＞0.05）。各组尿素氮（BUN）与替米沙坦组相比,均具有统计学差异（P＜0.05）,考虑为因为替米沙坦在肾脏代谢,可能对肾功能造成一定影响所致。3.光学显微镜下观察HE、PAS及Masson染色后的肾脏标本:空白组大鼠肾小球形态基本正常,结构完好。与空白组大鼠相比,模型组可见代偿性扩张的肾小球,部分肾小球皱缩,部分肾小球血管肿胀、充血,部分肾小球毛细血管袢闭锁或狭窄,毛细血管内皮增生,系膜细胞广泛增生,伴系膜基质沉积,肾小球存在明显的分叶状或结节状改变,球囊壁变窄,球囊间隙普遍轻度变小;肾小管排列杂乱无章,管腔扩张,肾小管细胞肿胀,伴空泡变性,偶见肾小管萎缩,偶有局灶间质充血、水肿和炎细胞浸润,偶见及纤维组织增生。替米沙坦组可见轻度扩张的肾小球和极少数血管充血、肿胀的肾小球,未见明显增生的系膜基质,球囊间隙轻度缩窄,罕见球囊壁粘连;存在少量肿胀、变性的肾小管上皮细胞,排列较为整齐,间质极少量炎细胞浸润。中药各剂量组大鼠与模型组相比,肾脏损伤明显减轻,可见轻度充血的血管球,少量基质沉积在肾小球系膜区及轻度增厚的基底膜,未见球囊粘连;肾小管上皮细胞肿胀不甚,存在空泡变性,间质较少炎症细胞浸润。以高、中两剂量改善显著,低剂量改善较弱。4.免疫荧光显微镜观察:空白组大鼠肾小球系膜区无明显IgA荧光沉积,模型组与各药物干预组大鼠肾小球系膜区可见颗粒状或团块状荧光强度不等的IgA荧光沉积,组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。与空白组比较,模型组IgA荧光沉积明显增强（H=-46.5,P’=0.000）;与模型组相比,替米沙坦组和中药高、中剂量干预后的大鼠肾脏IgA荧光沉积强度均有所下降（P’＜0.05）;与替米沙坦组比较,中药各剂量干预组IgA荧光沉积强度无统计学差异（P’＞0.05）;中药各剂量干预组间的IgA沉积强度比较无统计学差异（P’＞0.05）。5.电镜下观察大鼠肾脏超微结构:空白组系膜区未见明显异常,足突清晰,呈紧密有序状排列,基底膜完整,厚度均一;模型组系膜区可见大片高密度电子致密物散乱分布,足突排列杂乱无章,呈大面积融合,部分脱落,基底膜薄厚不等;各药物干预组可明显改善大鼠的肾脏病理损伤,替米沙坦组及中药高剂量组仅见少量高密度电子致密物分布在系膜区,极少足突出现融合,基底膜薄厚较为一致;可见中等量高密度电子致密物分布于中药中、低剂量组系膜区,少部分足突融合,存在小灶脱落,基底膜薄厚不一,以低剂量组较为严重。6.ELISA检测结果:模型组大鼠血清中的IL-6、IL-17A表达水平与空白组相比明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,经替米沙坦及加味黄芪赤风汤干预后的大鼠血清中的IL-6、IL-17A表达水平均有所降低,其中替米沙坦组及中药高剂量组与模型组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）,中药中、低剂量组与模型组相比,不具备统计学差异（P＞0.05）。7.Western Blot检测结果:与空白组相比,NF-κB P65蛋白的表达水平在模型组、替米沙坦组、中药各剂量干预组大鼠肾组织中无统计学差异（P＞0.05）。与空白组比较,p-NF-κB P65、MMP9、HSP90蛋白在模型组大鼠肾组织中的表达水平均有所升高（P＜0.05）;与模型组比较,经替米沙坦和加味黄芪赤风汤干预后的大鼠肾组织中的p-NF-κB P65、MMP9、HSP90蛋白表达水平均明显下降（P＜0.05）;与替米沙坦组比较,p-NF-κB P65、MMP9、HSP90蛋白在中药高剂量组大鼠肾组织中的表达水平无统计学差异（P＜0.05）,在中药中、低剂量组大鼠肾组织中的表达水平存在统计学差异（P＞0.05）。8.免疫组化检测结果:与空白组比较,模型组、替米沙坦组、中药各剂量干预组大鼠肾组织NF-κBP65蛋白表达水平无统计学意义（P＞0.05）。与空白组比较,p-NF-κB P65、MMP9、HSP90蛋白表达水平在模型组大鼠肾组织均有所升高（P＜0.05）;与模型组比较,经替米沙坦组和加味黄芪赤风汤干预后的大鼠肾组织中p-NF-κB P65、MMP9、HSP90蛋白表达水平均明显下降（P＜0.05）;与替米沙坦组比较p-NF-κB P65、MMP9、HSP90蛋白在中药高剂量组大鼠肾组织的表达水平无统计学差异（P＜0.05）,在中药中、低剂量组大鼠肾组织的表达水平存在统计学差异（P＞0.05）。结论:1.IgA肾病大鼠血清IL-17信号通路相关炎性分子IL-6、IL-17A的表达水平升高。2.IgA肾病大鼠肾组织IL-17信号通路相关分子p-NF-κB P65、MMP9、HSP90的表达水平升高。3.加味黄芪赤风汤可以下调IL-17信号通路相关分子IL-6、IL-17A、p-NF-κB P65、MMP9、HSP90的表达水平,从而抑制肾脏炎症反应和肾脏纤维化。4.加味黄芪赤风汤对IgA肾病大鼠肾脏的保护作用,可能与该方下调IL-17信号通路抑制肾脏炎症反应和肾脏纤维化有关。