梨PPO基因片段的克隆与表达及杂种后代同工酶分析

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:iammycsj
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以茌梨(PyrusbretschnederiRehd)为试材,进行了PPO基因片段的克隆并检测该基因在果实发育和贮藏过程中Pb-PPO1的表达;分析了黄金梨(P.pyrifoliaNakai)×鸭梨(P.bretschneideriRehd)和黄金梨(P.pyrifoliaNakai)×砀山酥(P.bretschneideriRehd)两个杂交组合后代中PPO同工酶的变异情况,结果表明:   1.利用荧光定量PCR方法,从茌梨成熟果实中克隆了一个PPO基因片段,命名为Pb-PPO1。该片段与已报道的日本梨(Pyruspyrifolia)的Pc-PPO碱基同源性为99%,氨基酸同源性为98%。半定量PCR和荧光定量PCR对Pb-PPO1基因在茌梨不同生长发育阶段和贮藏过程中的基因表达分析,结果表明在茌梨花后50d的幼果中Pb-PPO1基因的表达丰度最高,在随后的生长发育期间,Pb-PPO1基因表达逐渐降低,并维持在较低水平。果实采收后,在贮藏前期Pb-PPO1基因表达丰度呈上升趋势,贮藏14d时表达丰度达到最大值,但其表达量远低于花后50d的水平,之后呈下降趋势。果实中PPO活性变化与Pb-PPO1基因表达趋势一致,分别在花后50d和采后14d时最高。研究结果还表明果实采后Pb-PPO1的mRNA变化趋势还与果实的PPO活性相似。   2.利用聚丙烯酰胺电泳,对黄金梨×鸭梨、黄金梨×砀山酥两个杂交组合后代的群体PPO同工酶分析结果表明,整个PPO同工酶在上述杂种后代群体中共有7条谱带,其中迁移率值为0.393、0.432的两条酶带出现在所有的后代个体中,为所测个体共有的基本酶带。迁移率为0.566的谱带,出现在黄金梨×鸭梨杂交组合后代所测的所有的个体中;迁移率为0.570的谱带,出现在黄金梨×砀山酥梨杂交组合测定的所有个体中。黄金梨×鸭梨杂交组合后代包含迁移率为0.312、0.345、0.393、0.432、0.460、0.566条带的植株与包含迁移率为0.275、0.312、0.393、0.432、0.566条带的植株分离比为1∶1;黄金梨×砀山酥梨杂交组合后代包含迁移率为0.275、0.309、0.393、0.432、0.570条带的植株与包含迁移率为0.309、0.345、0.393、0.432、0.462、0.570条带的植株分离比也为1∶1。
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