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为了建立快速、简单、方便的克伦特罗(Clenbuterol, CL)检测方法,本试验采用重氮法将CL与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin, BSA)、卵清白蛋白(Ovalbumin, OVA)偶联,产生免疫原CL-BSA,包被抗原CL-OVA,以CL-BSA作为免疫原,用等剂量的福氏完全佐剂乳化CL-BSA,免疫6周龄BALB/C小鼠。试验目的：(1)通过制备高效价的CL多克隆抗体,构建克伦特罗酶联免疫吸附检测试剂盒；(2)运用杂交瘤技术,分离CL单克隆抗体,构建克伦特罗胶体金检测试纸条。1、CL酶联吸附检测试剂盒小鼠经CL-BSA多次免疫后,分离小鼠血清,得抗血清效价为128000,与莱克多巴胺(Ractopamine, Rac)、沙丁胺醇(Salbutamol, Sal)交叉反应率为0.1%,具有很强的特异性。用CL抗血清建立了CL间接竞争ELISA法,得到标准曲线的回归方程loght y=-0.8756x+1.6958,相关系数为0.995,可检测范围为1ng/mL-10μg/mL,并检测出饲喂了含CL猪的尿样中含有CL。2、CL胶体金检测试纸条小鼠经CL-BSA加强免疫后3天,取小鼠脾细胞,利用聚乙二醇(PEG)4000将其与骨髓瘤细胞SP2／0进行融合,制备杂交瘤细胞。经过对培养上清的筛选和杂交瘤细胞的克隆化,最终得到3株能分泌克伦特罗抗体的杂交瘤细胞株：1A1、1B5、和2H9。用间接ELISA法测得杂交瘤培养上清效价分别达到1：2000、1：1200、1：800。最后用扩大培养所得的杂交瘤细胞诱导小鼠产生产生腹水,制备单克隆抗体。CL检测试纸条的研制：本试验利用CL单抗标记40nm胶体金,标记胶体金稳定。将标记胶体金CL-OVA和羊抗鼠免疫球蛋白G(IgG)喷涂在硝酸纤维膜(NC)膜上,CL-OVA条带作为检测线,羊抗鼠IgG条带作为质控线,制备得到可快速检测盐酸克伦特罗的胶体金检测试纸条。将待测样品滴在试纸条吸样品区,在毛细管作用下,样品沿着膜移动。根据竞争抑制免疫层析原理,如果样品中没有CL,质控线和检测线均显色；相反,检测线不显色,质控线显色。该法可在10分钟内完成对CL的检测,最小检测限为lppb。该检测方法快速、准确、灵敏、操作简便,适合非专业人员在屠宰现场检测克伦特罗。