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目的:卵巢癌是妇科常见的三大恶性肿瘤之一,占妇科恶性肿瘤发病率的第二位,因卵巢位于盆腔深部,症状隐匿,早期发现困难,且治疗困难,易复发转移,晚期卵巢癌患者的5年生存率仅为30%,是女性生殖系统癌症相关死亡率的首要原因,严重威胁女性生命和健康。CircRNA是一种具有闭合环状结构的新型RNA。因其结构稳定,在不同的物种中表现出良好的保守性,具有组织特异性和在不同发育阶段的表达特异性,逐渐成为研究热点。到目前为止,已经在多种肿瘤研究中证实了circRNA的异常表达具有普遍性,一些circRNA的表达与TNM分期、分化、肿瘤大小、转移、侵袭等因素相关。但目前卵巢癌与circRNA的相关性研究鲜见报道,卵巢癌中circRNAs的表达和作用机制仍然很大程度上未知。上皮性卵巢癌(EOC)是卵巢癌最主要的病理亚型,约占90%以上。在EOC的病理亚型中,高级别卵巢浆液性癌(HGSOC)占60-70%,所占比例最高。HGSOC往往预示着更差的临床预后。现有研究表明,HGSOC与低级别卵巢浆液性癌有不同的发病机制。尽管HGSOC具有异质性,但目前临床患者的治疗并无特异性,进一步明确HGSOC的发病机制并发现潜在的肿瘤标志物或治疗靶点对于提高HGSOC患者的5年存活率至关重要。本研究应用高通量测序检测3例HGSOC组织和3例正常卵巢组织中差异表达的circRNAs,结合circRNA的差异倍数、P值、FDR、fpkm等,选择8个circRNA在HGSOC和卵巢良性病变组织中进行qRT-PCR验证高通量测序结果,筛选其中差异倍数最高的circRNA(hsa-circ-0002755)在HGSOC组织和卵巢癌细胞系中进一步验证,并进行临床病理生物学特征分析;构建hsa-circ-0002755-siRNA质粒和过表达质粒转染卵巢癌细胞,通过CCK-8、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术、Western Blot等实验方法探讨hsa-circ-0002755对卵巢癌生物学功能的影响;通过生物信息学软件预测与hsa-circ-0002755直接结合的miRNA及靶基因,双荧光素酶实验验证预测的靶向结合,检测HGSOC组织中hsa-miR-211-3p的表达,并分析与hsa-circ-0002755表达的相关性;构建hsa-circ-0002755-siRNA质粒和过表达质粒转染卵巢癌细胞,检测hsa-miR-211-3p、CDKN1B的表达变化,构建hsa-miR-211-3p-siRNA质粒和过表达质粒转染卵巢癌细胞,检测CDKN1B的表达,进而阐明hsa-circ-0002755通过竞争性抑制hsa-miR-211-3p调控靶基因CDKN1B的表达,为探讨HGSOC的发病机制提供新的思路和依据。方法:1、高通量测序检测3例HGSOC组织和3例正常卵巢组织中差异表达的circRNAs,结合差异表达的circRNA的差异倍数、P值、FDR、fpkm,选择8个circRNA进行qRT-PCR实验验证高通量测序结果,并筛选其中差异倍数最高的circRNA进行临床病理生物学特征分析。2、将hsa-circ-0002755干扰质粒瞬时转染至卵巢癌细胞SKOV3,将hsa-circ-0002755过表达质粒瞬时转染至卵巢癌细胞OVCAR-3。通过CCK-8实验检测卵巢癌细胞增殖能力、划痕实验检测迁移能力、Tranwell实验检测侵袭能力、流式细胞仪检测细胞凋亡、Western Blot检测侵袭相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达来明确hsa-circ-0002755表达水平变化对卵巢癌细胞系生物学功能的影响。3、双荧光素酶实验检测hsa-circ-0002755与hsa-miR-211-3p、hsa-miR-211-3p与CDKN1B的靶向结合;通过qRT-PCR检测HGSOC组织和卵巢癌细胞系中hsa-circ-0002755、hsa-miR-211-3p、CDKN1B的表达并分析其相关性;检测并分析hsa-circ-0002755表达变化对hsa-miR-211-3p、CDKN1B的影响;检测hsa-miR-211-3p表达变化对CDKN1B的影响;Western Blot检测hsa-circ-0002755表达变化对CDKN1B蛋白表达的影响。结果:1、本研究应用高通量测序技术,对3例HGSOC组织和3例正常卵巢组织进行circRNA测序分析,发现了710个circRNAs在HGSOC组织中差异表达,其中表达上调的CircRNA354个,表达下调的CircRNA356个。qRT-PCR验证结果显示:circRNA385,circRNA2058,circRNA3336,circRNA2606,hsa-circ-0002755(circRNA1656)均下调,而circRNA1312和circRNA7474均上调,均P值<0.05,具有统计学意义。hsa-circ-0002755是经qRT-PCR验证与高通量测序结果一致且差异倍数最高的circRNA。在HGSOC组织和卵巢癌细胞系中均证实hsa-circ-0002755低表达,且与肿瘤FIGO分期相关。2、CCK-8实验结果显示:hsa-circ-0002755干扰质粒转染的卵巢癌细胞增殖能力增强;hsa-circ-0002755过表达质粒转染的卵巢癌细胞增殖能力减弱;表明hsa-circ-0002755抑制卵巢癌细胞增殖。划痕实验结果表明:hsa-circ-0002755干扰质粒转染的卵巢癌细胞迁移能力明显增强;hsa-circ-0002755过表达质粒转染卵巢癌细胞迁移能力明显降低;表明hsa-circ-0002755抑制卵巢癌细胞迁移能力。Transwell实验结果表明hsa-circ-0002755干扰质粒转染的卵巢癌细胞侵袭能力明显增强;hsa-circ-0002755过表达质粒转染的卵巢癌细胞侵袭能力明显降低;Western Blot实验检测侵袭相关蛋白E-cadherin、vimentin,hsa-circ-0002755干扰质粒转染卵巢癌细胞组中,E-cadherin蛋白表达下调,vimentin蛋白表达上调;hsa-circ-0002755过表达质粒转染卵巢癌细胞组中,E-cadherin蛋白表达上调,vimentin蛋白表达下调;表明hsa-circ-0002755抑制EMT,进而抑制细胞的侵袭;Transwell实验与Western Blot实验结果均表明hsa-circ-0002755抑制卵巢癌细胞侵袭能力。流式细胞仪检测细胞凋亡结果表明:hsa-circ-0002755干扰质粒转染的卵巢癌细胞凋亡减少;过表达质粒转染的卵巢癌细胞凋亡增加;Western Blot实验检测凋亡相关蛋白,结果显示:hsa-circ-0002755干扰质粒转染卵巢癌细胞组中,hsa-circ-0002755表达下调,cleaved caspase3、cleaved caspase9、bax蛋白表达下调,bcl-2蛋白表达上调;而在hsa-circ-0002755过表达质粒转染卵巢癌细胞组,hsa-circ-0002755表达上调,cleaved caspase3、cleaved caspase9、bax蛋白表达上调,bcl-2蛋白表达下调;均支持hsa-circ-0002755促进卵巢癌细胞凋亡。3、双荧光素酶实验证实hsa-circ-0002755与hsa-miR-211-3p、hsa-miR-211-3p与CDKN1B靶向结合。hsa-miR-211-3p在HGSOC组织中高表达,与hsa-circ-0002755在HGSOC组织中的表达呈负相关。在卵巢癌细胞中,hsa-circ-0002755低表达,hsa-miR-211-3p高表达,CDKN1B低表达。hsa-circ0002755过表达质粒转染卵巢癌细胞,hsa-miR-211-3p表达降低,CDKN1B表达升高;hsa-circ-0002755干扰质粒转染卵巢癌细胞,hsa-miR-211-3p表达升高,CDKN1B表达降低。hsa-miR-211-3p过表达质粒转染卵巢癌细胞,CDKN1B表达降低;hsa-miR-211-3p干扰质粒转染卵巢癌细胞,CDKN1B表达升高。结论:1、HGSOC组织和正常卵巢组织高通量测序共发现了差异表达的circRNA710个,其中354个表达上调,356个表达下调。2、Hsa-circ-0002755在HGSOC组织和卵巢癌细胞系中均低表达,且与FIGO分期显著相关。3、Hsa-circ-0002755抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移,促进卵巢癌细胞凋亡,发挥抑癌作用。4、Hsa-circ-0002755竞争性抑制hsa-miR-211-3p并靶向调控其下游靶基因CDKN1B,影响HGSOC生物学功能。