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研究背景类风湿关节炎(RA)是一种慢性自身免疫炎症性疾病,其特征是滑膜细胞过度增殖,单核细胞浸润到滑膜中,关节软骨和骨骼的早期破坏以及对肌肉骨骼系统造成进行性损伤,从而导致患者体能的丧失和生活质量下降。尽管21世纪开启了生物制剂以及小分子药物比如JAK抑制剂等治疗RA的新局面,但从NSAIDs到DMRADS和生物制剂的治疗仍然会引起严重的副作用,并且这些治疗手段仅诱导部分患者中引起缓解,使大多数受RA影响的个体依然存在持续的慢性炎症病理过程。IL-1β和IL-18在RA中的病理生理学中的作用已经确立。具有生物活性的IL-1β和IL-18的加工和释放取决于Caspase-1,而Caspase-1的激活需要炎性小体复合物的激活。其中研究最深入的例子是由NLR家族成员NLRP3组成的炎性小体,体内体外实验均支持NLRP3炎性小体参与了 RA的发病机制,但是目前对RA中AIM2炎性小体认识尚不充分。因此,本次研究旨在探究AIM2炎性小体在RA发病机理中的作用。研究内容第一章AIM2通路在RA与OA血清和滑膜中表达差异研究目的观察AIM2在RA与OA中血清中的水平,观察AIM2炎性小体信号通路相关蛋白在RA与OA滑膜组织中的表达差异,并且分析AIM2炎性小体信号通路蛋白表达水平与临床指标ESR、CRP的相关性。方法纳入符合分类标准的49例RA患者与25例OA患者的血清采用ELISA检测血清中AIM2的表达水平。从南方医科大学中西医结合医院病理科中收集RA与OA膝关节炎滑膜组织分别41例和26例,行免疫组化染色,包括AIM2、ASC、Caspase-1、IL-1 β,根据染色结果进行半定量H score评分,然后H score与相应患者的ESR、CRP进行相关性分析。结果在血清检测中,AIM2的水平在OA和RA患者血清中的表达未观察到显著差异。RA滑膜组织中的AIM2,ASC,Caspase-1和IL-1β的表达高于OA。AIM2与 ESR 呈正相关(r=0.74,P<0.001,95%CI:0.38-0.9),ASC 与 ESR 呈正相关(r=0.5,P<0.001,95%CI:0.16-0.74),IL-1β 与 ESR呈正相关(r=0.62,P<0.001,95%CI:0.31-0.81)。AIM2 与 CRP 呈正相关(r=0.65,P<0.003,95%CI:0.25-0.86);ACS 与 CRP 呈正相关(r=0.42,P<0.05,95%CI:0.05-0.69);IL-1β与 CRP 呈正相关(r=0.41,P<0.05,95%CI:0.05-0.67)与 CRP 呈正相关。结论RA滑膜组织中AIM2炎性小体信号通路相关蛋白的表达高于OA滑膜组织,并与临床疾病活动指标正相关提示AIM2炎性小体信号通路参与了 RA的发病机制。第二章AIM2在RA与OA滑膜成纤维细胞中表达差异研究以及AIM2在RASFs中的功能目的观察AIM2在RA与OA滑膜成纤维细胞中的表达水平,并研究AIM2在RA滑膜成纤维细胞中的功能。方法采用组织免疫荧光共染定位AIM2在RA与OA滑膜组织中的表达,通过聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹比较AIM2在RA以及OA中的滑膜成纤维细胞中的表达情况。采用siRNA沉默RASFs中的AIM2,采用CCK-8法、流式细胞术、transwell实验评估沉默AIM2后RASFs的增殖、凋亡以及迁移能力。结果与OA相比,RA滑膜成纤维细胞中的AIM2的mRNA及蛋白表达水平在RA中显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。siRNA沉默RASFs中AIM2后,与对照组相比,RASFs的增殖能力减弱,凋亡率和迁移细胞数与对照组比较差异没有显著性。结论AIM2在RA滑膜成纤维细胞中表达增高,沉默后可抑制滑膜成纤维细胞的增殖能力,可能为RA滑膜成纤维细胞相比OA或者健康对照者具有不同的生物学特征的物质基础。第三章三水白虎汤对AIM2通路的作用目的研究三水白虎汤对AIM2通路的调节作用。方法制备SSBH含药血清干预RA滑膜成纤维细胞,分别采用CCK-8法、划痕试验观察SSBH对RA滑膜成纤维细胞的增殖和迁移的影响,同时通过聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹观察SSBH对AIM2炎性小体信号通路中AIM2、ASC、Caspase-1的mRNA以及蛋白水平的调节作用,采用ELISA观察SSBH对IL-1β的影响。结果在细胞增殖实验中,与NS组相比较,10%SSBH和20%SSBH干预RA滑膜成纤维细胞48h和72h均有抑制增殖的作用(P<0.05);在划痕实验中,10%SSBH和20%SSBH的平均愈合率均低于NS组,差异具有统计学意义(P<0.05)。SSBH可下调AIM2炎性小体信号通路相关蛋白的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论SSBH抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖和迁移可能与其下调AIM2炎性小体信号通路有关。研究结论(1)AIM2炎性小体信号通路可能参与了 RA的发病机制,(2)AIM2在RA滑膜成纤维细胞中的高表达促进了其增殖,(3)SSBH可能通过下调AIM2通路发挥抗RA作用。