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黑果腺肋花楸(Aornia mealnocarpa Elliot),又名不老莓。其果实富含大量的多酚类、黄酮类、芳香类等功能成分,其中花色苷含量高达1%。本课题组前期实验发现黑果腺肋花楸花色苷(Anthocyanin in Aornia mealnocarpa Elliot,AMA)具有很强的抗氧化、抗癌、抗衰老、降糖降脂等功能。肝纤维化(HF)被认为是最常见的慢性疾病之一。主要效应细胞是肝星状细胞(HSC)。当肝细胞出现纤维化时,转化生长因子β1(TGF-β1)的表达量随之增高,同时它也是星状细胞增殖和胶原生成的有效诱导剂。此外,TGF-β1的表达还与肝细胞中的形态改变有关,例如上皮间充质转化(EMT)。因此,探索EMT的机制对于开发新的有效的肝病治疗方法非常重要。此外,旨在破坏TGF-β1产生或用特定小分子阻断信号转导的策略对产生有效的肝病治疗方法具有重要的理论和实践意义。鉴于目前研究报道多酚类与肝疾病具有密切的关系,所以我们推测AMA在抗肝纤维化领域有着重要的意义。但是,AMA在TGF-β1诱导的肝细胞EMT中的细胞作用机制尚未探索。基于TGF-β/Smad信号通路、氧化应激以及炎症因子对肝纤维化的重要影响。本研究采用了TGF-β1诱导的HSC-T6细胞模型和CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型,并且外援施加AMA对肝纤维化进行干预。采用了细胞和分子生物学技术手段,对AMA的抗肝纤维化效果进行评价。同时进一步探究了AMA抗肝纤维化的分子机制,探讨其对肝纤维化的氧化还原系统及炎症积累的影响。初步阐明AMA干预肝纤维化的作用机制,从而为肝纤维化学说的丰富及花色苷资源的开发利用提供科学理论依据。方法与结果:1)AMA对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞肝纤维化的作用及机制研究通过TGF-β1诱导的方式建立HSC-T6细胞模型,体外培养HSC-T6细胞24小时后,同时添加TGF-β1和不同剂量的AMA作用于HSC-T6细胞48小时,通过肝功能指标检测,以及采用RT-PCR和Western Blotting等方法进行机制探讨,探究不同剂量AMA对HSC-T6细胞的抑制效果。结果显示,AMA可以有效抑制谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)等指标,降低白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)等炎症因子mRNA水平。并且抑制α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(ColagenⅠ)等蛋白的表达。2)AMA对小鼠肝纤维化的干预作用以CCl4诱导的方式加速小鼠肝纤维化,同时给予不同浓度AMA(20mg/Kg及40mg/Kg)进行干预。AMA对小鼠体重具有一定的调控作用,对肝系数的异常升高具有显著的抑制效果。HE染色和Masson’s三色染色结果显示在肝组织形态结构上AMA对于肝纤维化小鼠具有一定的干预。同时AMA对于肝纤维化小鼠血液和肝组织中肝功能指标具有显著的作用效果。以及改善肝组织氧化应激(SOD、GSH-PX)水平。上述结果说明:AMA能够减轻肝纤维化症状,且呈剂量相关性。3)AMA对小鼠肝纤维化的干预机制本部分内容在前期对AMA的抗肝纤维化作用效果评价的基础上深入研究其作用机理。检测AMA对肝纤维化小鼠肝组织中,炎症因子(IL-1、IL-6、TNF-α、COX-2)的mRNA表达情况,研究表明AMA能够降低肝组织中炎症的积累,并且效果显著。与此同时AMA还能有效抑制肝纤维化过程中TGF-β/Smad信号通路中TGF-β1、P-Smad2蛋白以及α-SMA、ColagenⅠ蛋白的表达。以上结果说明:AMA抑制肝纤维化可能是通过TGF-β/Smad信号通路来实现的,从而达到延缓肝纤维化的作用功效。