微生物食品防腐剂的筛选及活性研究

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采用混菌法,以鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母、枯草芽孢杆菌及蜡状芽孢杆菌为腐败指示菌,从土样、有机质样品、各种泡菜及传统型食品、大型真菌、各种海产品、植物样品中进行分离。共分离到活性菌株600株,对活性较高的菌株初步分类:地衣芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌。以1801为代表做活性物质提取。以TYG液体培养基发酵48h,6000 r·min-1离心20min,离心取上清液pH3沉淀并用80%乙醇提取,提取液抽干得粗提物。乙醇粗提物在偏碱性水中可完全溶解。抑菌物质稳定性试验显示:粗提物对蛋白酶K、热、酸碱都较稳定。对粗提物的分离纯化进行摸索:经HPLC分析后作制备及二级制备提纯;过大孔树脂后经LC-MS分析;过离子交换柱后经LC-MSMS分析。LC-MS图谱分析,其中含有1452、1466、1480、1494、1508和1030、1044、1058两组同系物。本文报道该拮抗菌的分离、鉴定、抑菌效果评价及活性物质的初步纯化与理化性质分析。对地衣芽孢杆菌1801进行培养基优化试验。对1801主要的影响因素pH、接种量、装样量做了单因素试验,确定最适pH为7.2、接种量为5%、装样量为100ml。以胰蛋白胨、葡萄糖、酵母作三因素三水平正交试验。得到了优化的培养基组成:最终得出优化培养基胰蛋白胨为1%、酵母粉为0.02%、葡萄糖为0.5%、NaCl为0.5%、pH7.4。以藤黄微球菌(Micrococcus luteus)菌体为指示菌进行初筛,总共筛选了3930株放线菌。用双层平板进行复筛,赛选出14株活性菌株。其中挑选出株活性好,生长速度快、周期短的5株活性菌株,进行抑菌谱检测。找出活性高、生长速度快、周期短、抑菌谱广的菌株2925,并对它进行分类鉴定,鉴定出2925为小单孢菌。
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