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目的:体外组织培养法诱导羊膜基质细胞向神经细胞分化。
方法:将新鲜去上皮羊膜(dAM-0W)和完整羊膜(iAM-0W)固定于特制的培养插件(insert)上进行组织培养,采用神经细胞分化培养基诱导羊膜基质细胞的分化。在培养l周、4周时进行Hoechst染色,观察基质细胞的增殖情况。取新鲜羊膜(dAM-0W)、培养4周的去上皮羊膜(dAM-4W)及完整羊膜(iAM-4W),分别提取RNA进行实时荧光定量PCR检测、制备组织块进行免疫荧光染色、提取蛋白质进行Western Blot印迹检测,以分析基质细胞起源的神经细胞标记物的表达情况。
结果:Hoechst染色结果显示:培养4周的去上皮羊膜(dAM-4W)及完整羊膜(iAM-4W)其基质细胞明显比培养1周时减少。实时荧光定量PCR、免疫荧光、蛋白质印迹结果均显示:神经元标记物NF200、TUBB3,少突胶质细胞标记物MBP,神经干细胞标记物Nestin,在新鲜羊膜的基质细胞均不表达,而在体外培养4周后的去上皮羊膜和完整羊膜的基质细胞几乎等量表达;而星形胶质细胞标记物GFAP,在新鲜羊膜以及培养4周后的去上皮羊膜和完整羊膜基质细胞都不表达。
结论:羊膜基质细胞在组织培养过程中发生部分细胞凋亡;在神经细胞分化培养基诱导下,羊膜基质细胞可以分化形成神经元、少突胶质细胞和神经干细胞,未能分化形成星形胶质细胞;羊膜上皮细胞对羊膜基质细胞增殖、分化的影响不明显。