Rap1（Ras相关蛋白1）是一种单体G-蛋白，俗称小G蛋白酶，结合GTP时为活性形式，结合GDP时为失活形式。基于RalGDS-RBD与Rap1GTP和Rap1GDP形式亲和力的不同，我们设计合成了短肽PepN、Pep-RBD以及带有CPPs和FAM标记的短肽Pep-RBD-CPPs-FAM。流式细胞计数实验表明，合成肽Pep-RBD-CPPs-FAM能够穿透人乳腺癌MDA-MB-231细胞膜，短肽孵育MDA-MB-231细胞5min后，绝大部分细胞被标记上荧光，Confocal成像实验证实了这一结论。经过GST-RBD assay实验证实，MDA-MB-231细胞分别经Pep-RBD和Pep-RBD-CPPs-FAM孵育不同的浓度和时间梯度后发现，Rap1GTP水平发生了显著降低。同时GST-RBD assay实验结果也证实，三种合成肽孵育MDA-MB-231细胞后细胞内RasGTP和RacGTP水平都没有发生变化。细胞粘附实验结果表明，Pep-RBD和Pep-RBD-CPPs-FAM孵育MDA-MB-231细胞后，MDA-MB-231细胞粘附能力发生明显的下降，然而MTT实验结果表明，经三种多肽孵育后， MDA-MB-231细胞活性不受影响。综上所述，我们设计的短肽Pep-RBD能够有效地竞争性结合MDA-MB-231细胞Rap1GTP，并抑制其介导的细胞粘附，为开发新型Rap1GTP标记物及其功能性抑制剂提供思路。