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免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)是一种临床上常见的以出血为特征的自身免疫性疾病,约占出血性疾病的1/3,其临床特征为外周血血小板减少,皮肤黏膜出现瘀点、瘀斑或有出血倾向。主要由于骨髓巨核细胞数量或功能的异常所致的血小板生成减少以及体内产生抗血小板自身抗体导致血小板破坏过多所造成。其发病原因尚不完全清楚,目前研究认为抗体介导的血小板破坏是经典ITP发病机制。近年来研究发现microRNAs广泛参与调控固有免疫和适应性免疫细胞的分化发育与功能发挥,在ITP发病机制中的基因调控作用逐渐受到重视。miR-155(microRNA-155)是参与天然免疫应答和特异性免疫应答的最重要的miRNA,在活化的免疫细胞中表达普遍升高,近年研究表明miR-155是免疫系统最主要的miRNAs之一。因此,本研究主要通过检测ITP患者外周血CD19+B细胞中miR-155的表达与B淋巴细胞功能的相关性,及其在ITP患者B淋巴细胞中的靶基因两部分进行研究探讨。第一部分 免疫性血小板减少症患者microRNA-155的表达与B淋巴细胞功能的研究目的:通过检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血CD19+B细胞中miR-155的表达与外周血B淋巴细胞共刺激分子CD80、CD86及胞内抗体IgG、IgM的表达水平,探讨miR-155在ITP发病机制中的作用。方法:采取免疫磁珠法分离2014年12月至2015年10月天津医科大学总医院血液科住院的ITP患者及健康对照者外周血中的CD19+B细胞,其中初诊ITP患者30例、完全缓解ITP患者25例、健康志愿者25例。应用实时荧光定量PCR检测三组CD19+B细胞中miR-155的表达水平,应用流式细胞术检测CD19+CD5+B、CD19+CD80+B、CD19+CD86+B及CD19+B细胞内抗体IgG、Ig M的表达水平,并分析以上指标与临床资料的相关性。结果:1、初诊组ITP患者CD19+B细胞中miR-155的表达水平(4.57±1.03)显著高于完全缓解组(0.79±0.13)和健康对照组(1.74±0.32),完全缓解组miR-155的表达水平显著低于健康对照组(均P<0.05);且治疗有效组ITP患者初诊时miR-155的表达水平(3.85±0.71)低于难治组患者初诊时miR-155的表达量(6.67±1.05)(P<0.05)。2、初诊组ITP患者CD19+CD5+B细胞的表达水平(8.48%±1.42%)显著高于完全缓解组(2.33%±0.72%)和健康对照组(1.86%±0.41%)(p<0.05)。3、初诊组itp患者cd19+cd80+b表达水平(31.37%±2.34%)高于完全缓解组(20.80%±2.67%)和健康对照组(15.95%±2.89%)(p<0.05)。4、初诊组itp患者cd19+b胞内抗体igg、igm两者表达水平分别为(35.20%±6.19%,26.87%±5.01%),显著高于完全缓解组(7.51%±1.91%,5.93%±2.23%)和健康对照组(8.23%±0.68%,8.21%±1.08%)(均p<0.05)。5、mir-155与cd19+cd5+b数量呈正相关(r=0.576,p=0.003),与外周血血小板计数呈负相关(r=-0.402,p=0.002);cd19+cd80+b、cd19+igg+、cd19+igm+表达水平与血小板计数均呈负相关(r=-0.424,r=-0.658,r=-0.526)(均p<0.05)。结论:mir-155在itp患者外周血b淋巴细胞中异常高表达,使共刺激信号分子cd80、cd86第二信号传递功能增强,从而导致b淋巴细胞异常活化,进而活化的cd19+cd5+b淋巴细胞数量及胞内抗体产生增多,介导免疫系统发生紊乱,参与itp的发病。抑制mir-155的表达将有望成为itp新的治疗靶点。第二部分 microrna-155在免疫性血小板减少症b淋巴细胞中靶蛋白的研究目的:通过检测免疫性血小板减少症b淋巴细胞中负性调控因子含sh2结构的5’肌醇磷酸酶-1(sh2-containinginositolphosphatase-1,ship-1)的表达,分析其表达水平与b淋巴细胞内mir-155及各种临床指标的相关性,探讨ship-1在itp发病机制中的作用。方法:采取免疫磁珠法分离2014年12月至2015年10月天津医科大学总医院血液科住院的itp患者及健康对照者外周血中的cd19+b细胞,其中初诊itp患者30例、完全缓解itp患者25例、健康志愿者25例。应用实时荧光定量pcr检测三组cd19+b细胞中ship-1的基因表达水平,应用westernblot检测ship-1的蛋白表达水平,分析以上指标与mir-155及各种临床指标的相关性。结果:1、初诊组itp患者cd19+b细胞中ship-1的基因表达水平(0.78±0.26)显著低于完全缓解组(1.91±0.53)和健康对照组(1.69±0.44),完全缓解组与健康对照组无统计学意义(p>0.05)。2、westernblot检测初诊组itp患者ship-1蛋白的表达水平比完全缓解组和健康对照组表达降低。3、初诊组itp患者cd19+b细胞中ship-1的表达与mir-155的表达水平呈负相关(r=-0.445,p=0.014)。结论:在ITP患者B淋巴细胞内miR-155可能通过沉默B淋巴细胞负性调控因子SHIP-1蛋白的表达来刺激B淋巴细胞受体活化,进而过度激活自身反应性B淋巴细胞,促进特异性抗体IgG、IgM的产生,介导血小板破坏,因此推测miR-155的过表达和SHIP-1的低表达可能共同导致机体免疫系统发生紊乱。