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海参(Stichopus Japonicus)内脏中含有蛋白质、多糖、皂苷等多种活性组分,具有抗肿瘤、抗炎、抗凝血等诸多功效。但是目前海参内脏大多作为海参加工的废弃物被丢弃,造成资源的极大浪费。为合理开发海参内脏资源变废为宝,因此,本课题以海参内脏为原料,采用酶解和醇沉得到海参肽和海参多糖,采用超滤和纳滤技术分级分离海参肽。通过迟发型变态反应、血清溶血素含量和碳廓清实验,评价海参寡肽的增强免疫力活性。采用Sevage法和离子交换法分离纯化海参多糖,研究多糖的纯度、单糖组成及比例,通过体外细胞实验和抗氧化实验,考察其抗肿瘤活性和抗氧化活性。论文得到以下主要研究结果:1.酶法水解海参内脏制备海参肽:以水解度和酶解液中多肽和寡肽含量为指标,比较中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶和菠萝蛋白酶的酶解效果,最终选择胰蛋白酶作为酶法水解海参内脏制备海参肽最佳水解用酶。经单因素实验考察底物浓度、加酶量、温度、时间和pH等对水解度的影响,并通过正交实验优化酶解工艺。结果表明,海参内脏酶解制备海参肽的最佳工艺条件是:底物浓度1.0%,加酶量22,500 U/g,温度37℃,pH 8.0,酶解时间5.0 h。在此条件下,海参内脏的水解度达到48.90%,酶解液中海参寡肽和海参多肽的含量分别为47.25%和52.68%。2.海参多肽和寡肽的分级分离:采用纳滤和超滤技术对海参肽进行除盐和分级分离,得到透过液和截留液。通过液相色谱检测,透过液中寡肽含量占74.08%,多肽含量占25.32%;截留液中寡肽含量占18.33%,多肽含量占81.40%,初步实现了海参多肽和寡肽的分离。3.海参寡肽增强免疫力活性研究:利用海参寡肽饲喂小鼠,分别设定低、中、高剂量组与空白对照组,低、中、高剂量分别灌胃浓度为85、170和510 mg/(kg.d)的海参寡肽溶液,空白组灌胃蒸馏水。灌胃30 d后,检测耳肿胀程度、吞噬指数和抗体积数。结果表明:海参寡肽低、中和高剂量组左右耳重量差分别为7.79±3.50 mg、8.64±3.45 mg和8.91±3.08 mg,与空白组(3.79±1.54 mg)相比,均具有极显著性差异(p<0.01),该项指标呈阳性。海参寡肽低、中和高剂量组吞噬指数分别为3.89±0.58、4.52±1.36和4.76±1.15,与空白组(3.10±0.76)相比,低剂量组具有显著性差异(p<0.05),中、高剂量组具有极显著性差异(p<0.01),该项指标呈阳性。海参寡肽低、中和高剂量组抗体积数分别为110±10.04、117.67±8.80和144.33±8.62,与空白组(108.67±9.18)相比,低、中剂量组无显著性差异(p>0.05),高剂量组呈极显著性差异,该项实验指标无统计学意义。由于细胞免疫和单核巨噬细胞功能实验结果均呈阳性,因此可以判断海参寡肽具有增强免疫力的活性。4.海参多糖的分离纯化:分别采用Sevage法和DEAE-52纤维素柱层析进一步纯化海参多糖,采用氯化钠溶液等度洗脱,合并相同的流份,得到5个不同的海参多糖HGⅠ、HGⅡ、HGⅢ、HGⅣ和HGⅤ,浓缩,透析除盐,采用高效液相色谱鉴定多糖的纯度及其分子量。研究发现,HGⅢ和HGⅣ呈现单一对称峰,其纯度较高,HGⅢ和HGⅣ分子量分别为162.7 kDa和139.4 kDa。通过PMP衍生化确定其单糖组成和比例,结果是,HGⅢ主要由甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖和半乳糖组成,以甘露糖为标准,其摩尔比为1.00:1.24:0.71:1.16。HGⅣ中单糖组成主要有甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖和半乳糖,其摩尔比为1.00:1.72:1.52:1.66。5.海参多糖抗肿瘤和抗氧化活性研究:采用MTT比色法研究HGⅢ和HGⅣ的抗肿瘤活性,研究发现,HGⅢ和HGⅣ具有抑制肺癌细胞株A549增殖的活性,其IC50分别为2.07 mg/mL和1.01 mg/mL,均具有良好的抗肿瘤活性。以DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基清除率为指标,考察HGⅢ和HGⅣ抗氧化活性。研究发现,两者均具有较好的抗氧化活性,HGⅢ清除DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基的IC50分别为1.21、0.582、1.29 mg/mL,HGⅣ的IC50分别为3.56、6.756、1.37 mg/mL。综上所述,本文对海参内脏制备海参肽和海参多糖及其生物活性进行了研究,为海参内脏变废为宝提供了一种新途径,也为海参内脏的综合利用提供了理论依据。