霉菌毒素是真菌产生的有毒的、次级代谢产物,广泛存在于不同种类的主要作物与饲料中,对人类和动物均有毒害作用。由于它的慢性毒性,霉菌毒素被认为是一种主要的公共健康威胁。霉菌毒素在所有的食品和饲料污染物中是最具有危险性的。霉菌毒素主要包括黄曲霉素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉素和HT-2毒素。许多研究表明霉菌毒素与生殖系统紊乱相关。然而关于霉菌毒素在卵母细胞成熟和孤雌胚胎发育能力的毒性影响方面的报道却很少。在本次试验进行之前,我们首先研究了小鼠和猪的卵母细胞对不同霉菌毒素的不同梯度浓度的敏感性,以此为预实验作为参考,并利用成熟率作为标志。我们发现,与小鼠的卵母细胞相比,猪的卵母细胞对大多数实验中涉及的霉菌毒素(包括AFB1,DON,ZEA和OTA)都更为敏感,除了 HT-2毒素之外。接着我们发现HT-2毒素是我们用到的几种毒素中毒性最高的一种,于是我们选择了 HT-2毒素来探究其对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育能力的影响。第一部分:HT-2毒素影响猪卵母细胞成熟T-2毒素是A类单端孢霉烯中的一种主要的霉菌毒素,它是单端孢霉菌毒素中毒性最强的。T-2毒素能对人类和动物体内增殖旺盛的细胞组织,如淋巴、造血和肠胃等产生各种毒性效应。HT-2毒素是T-2毒素脱乙酰化得到的一种重要的代谢物。在本实验中,我们研究了 HT-2毒素对猪卵母细胞成熟的毒性作用。我们用HT-2毒素对体外培养的猪的卵母细胞进行了处理,我们发现HT-2毒素处理会抑制猪的卵母细胞的极体排出与颗粒细胞的扩散。HT-2毒素处理后,减数分裂时期纺锤体构型发生了破坏,这可能是通过降低p-MAPK蛋白的水平导致的。同时,微丝的组装也遭到了破坏,说明HT-2毒素影响猪卵母细胞的细胞骨架。我们接下来探究了 HT-2毒素处理后卵母细胞未能发育成熟的原因。我们发现,HT-2处理后的卵母细胞ROS水平升高,说明细胞内发生了氧化应激。我们同时检测了毒素处理后细胞的早期凋亡与自噬。由于氧化应激可以引起凋亡,我们的实验结果表明,HT-2毒素引起的氧化应激诱发了凋亡和自噬,可能进一步影响了猪卵母细胞的成熟。第二部分:HT-2毒素影响猪孤雌胚胎的发育能力T-2毒素是真菌霉素产生的一种A类霉菌毒、,HT-2毒素是T-2毒素的一种主要代谢产物。T-2和HT-2毒素都对动物有毒性效应。然而,关于HT-2毒素对猪卵母细胞发育能力影响方面的研究甚少。我们之前的研究表明,HT-2处理会影响卵母细胞成熟。在此次实验中,我们发现HT-2毒素影响猪卵母细胞的发育能力与孤雌胚胎的发育。我们还从表观修饰层面对HT-2毒素影响孤雌胚胎发育的可能原因与机制进行了探究。对荧光强度的分析表明,HT-2处理后MI期的卵母细胞的5-甲基胞嘧啶水平升高,表明毒素处理的猪卵母细胞DNA甲基化水平升高。此外,组蛋白修饰也发生了改变。实验组的H3K4me2和H3K9me2水平也升高。实验结果表明,HT-2毒素会影响表观修饰,这可能是其降低猪的卵母细胞的发育能力的一个原因。