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【目的】制备福莫司汀-聚乳酸-羟基乙酸（poly-Lactide-co-Glycolide，PLGA）缓释微球，探讨福莫司汀对LN229胶质瘤细胞的局部缓释化疗作用，观察其对LN229胶质瘤细胞体外增殖、凋亡及耐药性的影响。相关结果可为进一步研究福莫司汀-PLGA缓释微球在胶质瘤化疗中的作用及效果打下基础。【方法】首先利用溶剂挥发萃取法制备福莫司汀-PLGA缓释微球，以扫描电镜进行形态学观察，并用高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）测定福莫司汀-PLGA缓释微球中福莫司汀的含量、包封率及体外释放率。继而，以PLGA空载体和替尼泊苷分别作为阴性及阳性对照，同时设细胞空白对照，检测福莫司汀-PLGA缓释微球浸出液对LN229胶质瘤细胞的毒性作用，根据不同浓度梯度的抑制率拟合曲线，计算福莫司汀在多种细胞中的半数抑制浓度（IC50）值，以及药物作用时间与抑制程度的关系，比较有无统计学差异。同时采用PI和Hochest双染细胞，荧光显微镜观察细胞凋亡和坏死情况。最后探讨福莫司汀-PLGA缓释微球14d、21d浸出液、空白微载体14d、21d浸出液及替尼泊甙对O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（O6-methylguanineDNA-methyltransferase,MGMT）表达的影响。【结果】1.制备福莫司汀-PLGA缓释微球，电镜测定微球粒径及表面特征，符合实验要求，灭菌备用。2.福莫司汀-PLGA缓释微球波峰良好，线性范围为0.1~100ug/ml，r=0.9995。低、中、高三种浓度的回收率均大于98%，日内、日间精密度均小于3.5%。福莫司汀-PLGA缓释微球载药率和包封率分别为（4.81±0.36）%和（87.15±5.12）%。3．体外释放量1d为11.3%，28d的累积释放量为88.47%，可持续释放28d，符合缓释制剂的特征。4.14d福莫司汀-PLGA微球浸出液0.27μg/ml、2.7μg/ml、27μg/ml、270μg/ml、2700μg/ml，对LN229胶质瘤细胞的24h的抑制率分别0、8.74%、44.09%、47.06%、57.06%；21d福莫司汀-PLGA微球浸出液0.27μg/ml、2.7μg/ml、27μg/ml、270μg/ml、2700μg/ml对LN229胶质瘤细胞的24h的抑制率分别为0、10%、10.648%、2.315%、77.315%；其中空白-PLGA缓释微球14d、21d浸出液对LN229胶质瘤细胞的抑制率均为0。替尼泊苷0.1μg/ml、0.5μg/ml、2.5μg/ml、12.5μg/ml、62.5μg/ml对LN229胶质瘤细胞的24h的抑制率分别为0、5.15%、19.77%、52.17%、90.15%；5.福莫司汀-PLGA缓释微球14d浸出液呈剂量依赖性的诱导LN229胶质瘤细胞凋亡，抑制其生长，并可导致MGMT表达明显下降，福莫司汀-PLGA缓释微球21d浸出液（2700μg/ml）明显诱导LN229胶质瘤细胞凋亡，抑制其生长，并可导致MGMT表达明显下降；不同浓度替尼泊苷（Teniposide,VM-26）可以诱导LN229胶质瘤细胞凋亡并对细胞生长有较高的的抑制率，但是对细胞MGMT表达无影响。空白载体对LN229胶质瘤细胞的凋亡、抑制率、MGMT表达均无作用。【结论】1.溶剂挥发萃取方法制备的福莫司汀-PLGA缓释微球形态、直径等指标满意可消毒备用；2.高效液相色谱（HPLC）方法测定福莫司汀-PLGA峰形良好，回收率、微球载药率和包封率、体外释放等均在良好范围；3.福莫司汀-PLGA缓释微球可以诱导LN229胶质瘤细胞系凋亡，抑制其增殖，降低耐药相关基因MGMT的表达，从而为福莫司汀的化疗提供了新途径。第一部分福莫司汀-PLGA缓释微球的制备和体外释放研究目的：制备福莫司汀-PLGA缓释微球，对其进行表征观察，并研究其体外释放规律。方法：以溶剂挥发萃取法制备福莫司汀-PLGA缓释微球，扫描电镜进行形态学观察，测定粒径、包封率、载药率。建立测定福莫司汀浓度的HPLC法，观察其专一性、精密度、回收率、稳定性。将福莫司汀微球置于PBS液中，测定不同时间福莫司汀的释放量，绘制体外释放曲线。结果：福莫司汀-PLGA缓释微球制备方法可靠，微球直径约29μm，形态光滑圆整。微球载药率和包封率分别为（4.81±0.36）%和（87.15±5.12）%。所建立的HPLC法专一性好、灵敏度高、重现性好。福莫司汀峰形良好，无杂质峰干扰，线性范围为0.1-100μg/ml，r=0.9995。低、中、高三种浓度的回收率均>98%，日内、日间精密度均<3.5%。体外释放量1d为11.3%，28d的累积释放量为88.47%，可持续释放28d。结论：福莫司汀-PLGA缓释微球符合缓释制剂特征，具有良好的体外释放性能。所建立的HPLC方法操作简便，准确可靠；第二部分微球浸出液对LN229胶质瘤细胞的毒性作用及MGMT表达的影响目的：探讨福莫司汀-PLGA缓释微球浸出液对LN229胶质瘤细胞的毒性作用及MGMT表达的影响。方法：MTT法检测福莫司汀-PLGA缓释微球浸出液对LN229胶质瘤细胞的抑制率。以空载体和替尼泊苷作为阴性及阳性对照，同时设细胞对照。根据不同浓度梯度的抑制率拟合曲线，计算福莫司汀-PLGA缓释微球在LN229细胞中的IC50（半数抑制浓度）值，是否随着药物作用时间的延长，细胞有明显被抑制改变，比较统计学差异。采用PI和Hochest双染，荧光显微镜观察细胞凋亡和坏死情况。福莫司汀-PLGA缓释微球14d、21d浸出液作用LN229细胞24小时后收集细胞，同时以空载体和替尼泊苷为阴性及阳性对照，采用Westernblot探讨福莫司汀-PLGA缓释微球14d、21d浸出液、空白微载体21d浸出液及替尼泊甙对MGMT表达的影响。结果：福莫司汀-PLGA微球浸出液呈剂量依赖性抑制LN229胶质瘤细胞的生长及诱导其凋亡，福莫司汀-PLGA缓释微球14d浸出液呈剂量依赖性的下调MGMT表达，福莫司汀-PLGA缓释微球21d浸出液（2700μg/ml）可导致MGMT表达明显下降；替尼泊苷呈剂量依赖性的诱导LN229胶质瘤细胞凋亡并对细胞生长有较高的的抑制率，但是对细胞MGMT表达无影响。空白载体对LN229胶质瘤细胞的凋亡、抑制率、MGMT表达均无作用。结论：福莫司汀-PLGA缓释微球可以诱导LN229胶质瘤细胞凋亡，抑制其增殖，降低耐药相关基因MGMT的表达，从而为福莫司汀的化疗提供了新途径。