中国南方几个地区蝙蝠、鼠、鼩鼱携带新发腹泻病毒的调查

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研究背景和目的感染性腹泻是指各种病原体引起的腹泻。了解致腹泻病原体对于防治工作十分重要。已知多种病毒可导致腹泻病,如人轮状病毒、诺如病毒、腺病毒等。近些年,有研究显示人双埃可病毒、博卡病毒、嵴病毒、Salivirus、Cosavirus、Bufavirus、Tusavirus等病毒可能是新发腹泻病毒,但对于这些病毒感染的流行病学尚未明了。蝙蝠、鼠和鼩鼱是人类一些病毒性感染的传染源,我们前期在对这些动物粪便标本的宏病毒组分析中能注释到某些新发腹泻病毒。因此,本项研究目的是进一步了解蝙蝠、鼠和鼩鼱携带新发腹泻病毒状况,了解这些病毒的分子特征及其系统进化情况,为探讨这些动物是否可以作为人类腹泻病的潜在传染源提供科学依据。研究方法1.样本本研究中采用的标本来自本课题组于2011-2014年在广州市、云浮市及海口市采集的蝙蝠标本(肺组织和粪便)以及2014-2017年在广州市及茂名市采集的鼠和鼩鼱标本(粪便)。粪便置于PBS溶液,肺标本置于含有RNA later溶液的冻存管中;所有标本使用前存放于一 80℃超低温冰箱。2.检测方法使用 MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit 试剂盒(Takara,China)提取肺组织以及粪便核酸。对样本中的博卡病毒、嵴病毒、Salivirus、Cosavirus、Bufavirus、双埃可病毒、Tusavirus 进行 PCR/RT-PCR 检测。使用 Primer Primer5软件设计引物,SeqMan软件拼接序列。3.系统进化分析使用MEGA6中的Clustal W对检测到的病毒核酸进行多序列比对,基于比对结果,构建系统进化树。使用软件SimPlot 3.5.1对序列重组情况和相似性分析。多个序列之间的核苷酸/氨基酸相似性使用MegAlign软件进行比对。研究结果1.样本基本情况共检测了蝙蝠粪便447份,蝙蝠肺脏组织144份,鼠粪便235份,鼩鼱粪便211份。2.新发腹泻病毒检出情况①蝙蝠粪便:嵴病毒阳性率5.39%(23/427),未检测到其他可疑腹泻病毒;②蝙蝠肺组织:144份标本均未检测到可疑腹泻病毒;③鼠粪便:在235份鼠粪便(褐家鼠223份;黄胸鼠12份)中检测到29份嵴病毒(12.34%),在两例鼠嵴病毒阳性样本中扩增出两条近全长序列;在褐家鼠中检测到博卡病毒1份(0.45%,1/223),并扩增出近全长基因序列,未检测到其他可疑腹泻病毒;④鼩鼱便:在211份鼩鼱粪便中检测到3例嵴病毒阳性(1.42%),未检测到其他可疑腹泻病毒。3.系统进化分析①在褐家鼠中检测到的1例人博卡病毒阳性样本,在系统发育树中与参考序列中的人博卡病毒聚集在一起,在序列相似性分析中提示与HBOV-2最相近,不存在重组情况;②蝙蝠、鼠、鼩鼱的嵴病毒阳性样本在系统发育树中聚为一大支,而且与参考序列中的鼠嵴病毒聚集在一起,提示本研究不同物种携带的嵴病毒较为相近。结论在褐家鼠、黄胸鼠、臭鼩鼱和小黄蝠粪便中均检测到嵴病毒,不同动物的嵴病毒有较大的基因相似性,提示嵴病毒在这些动物中存在跨物种传播的可能。褐家鼠可携带人博卡病毒,提示该病毒有人-鼠间传播的可能性。
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