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目的:观察Ras信号通路关键信号分子在不同时期小儿血管瘤组织中的表达,调控体外培养人血管瘤内皮细胞中Ras信号通路的表达,探讨Ras信号通路对血管瘤血管内皮细胞的影响及机制。方法:1.收集遵义医科大学附属医院小儿矫形外科2005-2017年间手术切除并经病理诊断为毛细血管瘤的组织标本,结合Mulliken分类法与Ki-67表达情况重新将标本进行分类和分期,提取增生期血管瘤和消退期血管瘤标本各30例,免疫组化检测并比较增生期血管瘤和消退期血管瘤组织中Ras、Raf-1、TSC2、mTOR、p70s6K、4E-BP1的表达情况。2.体外培养人血管瘤内皮细胞（北纳创联生物技术有限公司提供,品名:HemECs,货号:BNCC340867）并传代至第三代,取对数生长期细胞,血清饥饿处理24小时。分组及处理:普萘洛尔组加入含50μmol/L普萘洛尔的培养液4mL,雌二醇组加入含0.1ng/L雌二醇的培养液4mL,对照组加入完全培养基4mL,继续孵育24小时,收集细胞。Western blot检测血管瘤血管内皮细胞中Ras、Raf-1、TSC2、mTOR、p70s6K、4E-BP1蛋白表达,RT-PCR检测Ras、Ras、Raf-1、TSC2、mTOR、p70s6K、4E-BP1mRNA的表达,同期用流式细胞仪检测血管瘤血管内皮细胞周期的分布及凋亡率,分析各组Ras、Raf-1、TSC2、mTOR、p70s6K、4E-BP1表达水平与血管瘤血管内皮细胞周期分布及细胞凋亡的关系。结果:1.增生期血管瘤（n=30）和退化期血管瘤（n=30）中,TSC2、4E-BP1、p70s6K、Ras、Raf-1、mTOR的平均光密度值分别为0.176±0.024/0.2373±0.030、0.181±0.027/0.218±0.030、0.159±0.031/0.228±0.032、0.369±0.034/0.337±0.032、0.362±0.041/0.327±0.038、0.531±0.079/0.508±0.055,增生期血管瘤Ras、Raf-1的平均光密度明显高于消退期血管瘤（t=3.665、3.478,P<0.01）,mTOR的平均光密度高于消退期血管瘤（t=2.252,P<0.05）;增生期血管瘤TSC2、p70s6K、4E-BP1的平均光密度明显低于消退期血管瘤（t=8.636、8.365、4.709,P<0.01）。2.普萘洛尔组、雌二醇组和对照组血管瘤内皮细胞的总凋亡率（%）分别为15.41±0.75、3.41±0.40、4.84±0.45,与对照组比较,普萘洛尔组细胞凋亡率明显增加,雌二醇组细胞凋亡率降低,差异均有显著性（F=419.30,P<0.01）。3.普萘洛尔组、雌二醇组和对照组血管瘤内皮细胞的细胞周期分布（%）为G0/G1:74.53±1.66/50.47±1.05/60.21±1.14,S:22.35±0.92/42.60±0.74/32.93±1.23,G2/M:3.14±1.10/6.92±1.04/6.84±0.36,三组比较,差异有显著性（χ2=13.77,P<0.01）;与对照组比较,普萘洛尔组细胞的生长周期停滞于G0/G1期,S期细胞数减少;雌二醇组G0/G1期细胞减少,S期细胞明显增加。4.与对照组比较,普萘洛尔组（n=3）TSC2、4E-BP1、P70S6K蛋白表达倍数分别为1.568±0.192、1.534±0.140、1.690±0.123,较对照组明显增高,差异有显著性（F=44.4266.75、136.41,P<0.01）;Ras、Raf-1、mTOR分别为0.585±0.030、0.527±0.040、0.430±0.045,较对照组明显降低,差异有显著性（F=109.96、43.41、726.30,P<0.01）。雌二醇组（n=3）蛋白表达变化与普萘洛尔组相反,TSC2、4E-BP1、P70S6K蛋白表达倍数分别为0.673±0.067、0.662±0.092、0.563±0.077,较对照组明显著降低,差异有显著性（F=44.42、66.75、136.41,P<0.01）;Ras、Raf-1、mTOR分别为1.530±0.131、1.534±0.225、1.548±0.042,较对照组明显增高,差异有显著性（F=109.96、43.41、726.30,P<0.01）。5.与对照组相比,普萘洛尔组（n=3）TSC2、4E-BP1、p70s6KmRNA表达倍数分别为2.138±0.243、3.139±0.331、2.297±0.099,较对照组明显增高,差异有显著性（F=74.92、38.10、246.34,P<0.01）;Ras、Raf-1、mTORmRNA表达倍数分别为0.555±0.076、0.339±0.068、0.403±0.103,较对照组明显降低,差异有显著性（F=47.42、96.34、36.03,P<0.01）。雌二醇组（n=3）各基因mRNA表达变化与普萘洛尔组相反,TSC2、4E-BP1、P70S6K mRNA表达倍数分别为0.439±0.102、0.481±0.086、0.614±0.060,较对照组明显降低,差异有显著性（F=74.92、38.10、246.34,P<0.01）;Ras、Raf-1、mTORmRNA表达倍数分别为1.849±0.214、1.604±0.094、1.434±0.127,较对照组明显增高,差异有显著性（F=47.42、96.34、36.03,P<0.01）。结论:1.小儿血管瘤血管内皮细胞中有Ras信号通路关键信号分子的表达,血管瘤增生期Ras、Raf-1、mTOR表达高于消退期,TSC2、p70s6K、4E-BP1表达低于消退期。2.普萘洛尔通过负性调控Ras信号通路,上调TSC2,抑制mTOR/p70s6k信号通路,使体外培养人血管瘤内皮细胞细胞周期停滞于G0/G1期,诱发细胞凋亡。雌激素则相反。