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日本沼虾Macrobrachium nipponense，俗称青虾或河虾。是我国养殖产量较高的淡水虾类，年产量已达到26.51万吨。近年来，随着日本沼虾养殖规模的不断扩大和集约化程度的提高，营养齐全的专用商品配合饲料的开发已成为日本沼虾健康养殖可持续发展的关键因素之一。有关日本沼虾营养需求相关的遗传学基础研究仍不清楚，营养需求研究的针对性不强等，以至于市场上仍没有能满足日本沼虾生长和发育等营养需求的专业化商品配合饲料。
已有的研究表明，胆固醇和磷脂是甲壳动物两种重要的营养元素。研究人员已对斑节对虾(Penaeus monodon)、锯缘青蟹(Scylla serrate)等水产甲壳动物胆固醇营养需求量进行过广泛研究，且已发现磷脂可能对甲壳动物胆固醇的营养作用存在影响。迄今，有关日本沼虾胆固醇营养需求及磷脂与胆固醇是否存在影响等未见报道。且很少对胆固醇的营养相关功能基因进行探讨。
本文以日本沼虾为研究对象，通过胆固醇单因素添加水平投喂试验，以确定日本沼虾饲料中胆固醇的最适添加量;同时，介于磷脂可能对胆固醇的营养具有重要的影响，开展了胆固醇与磷脂的双因素不同添加水平的投喂实验研究;采用高通量测序技术，构建日本沼虾不同胆固醇添加水平的营养转录组文库并对其进行比较研究，并在同源分析和差异表达量比较分析的基础上筛选胆固醇营养相关的功能基因，并从中挑选了两个重要的功能基因(FAS基因和ERP基因)进行研究;运用RACE克隆技术、荧光定量PCR及不同胆固醇添加水平的投喂实验等。对筛选得到的胆固醇营养相关功能基因进一步探讨其与胆固醇营养功能相关的关系。
1.饲料中添加不同水平胆固醇对日本沼虾生长、饲料利用、体组成及免疫指标的影响
设计了六种等脂(8％粗脂肪)、等蛋白(40％粗蛋白)饲料，饲料中胆固醇的添加水平依次为0、3.0、6.0、9.0、12.0和15.0g kg-1(添加胆固醇后的饲料总胆固醇的实测含量分别为2.8、5.6、8.7、11.5、14.8和17.6g·kg-1)，对日本沼虾(初始体重0.17±0.03g)进行为期8周的饲养实验，以探讨饲料不同胆固醇添加水平对日本沼虾生长性能、饲料利用及非特异性免疫相关指标的影响。结果发现，当饲料中胆固醇的添加量达到9.0g kg-1时，日本沼虾增重率(WG)和特定生长率(SGR)最大，并显著高于对照组(P＜0.05);胆固醇添加水平为6.0g kg-1和9.0g kg-1的两组饲料的饲料系数(FCR)显著低于其他各组(P＜0.05)。通过二次回归分析可知，日本沼虾获得最高WG和SGR时，日本沼虾饲料最适胆固醇添加水平分别为9.99g kg-1和8.70g kg-1。各组间虾体水分、粗蛋白及脂肪含量差异均不显著(P＞0.05)。饲料胆固醇添加水平9.0g kg-1组日本沼虾肝胰腺总抗氧化能力(TAC)最大、且显著高于对照组和3.0g kg-1添加水平组(P＜0.05):饲料胆固醇添加水平9.0g kg-1组，日本沼虾肝胰腺谷胱甘肽过氧化物酶活力(GSH-Px)显著高于其他组(P＜0.05);9.0g kg-1和12.0g kg-1胆固醇添加组日本沼虾过氧化氢酶活性(CAT)显著高于对照组(P＜0.05);饲料胆固醇添加水平9.0g kg-1组，日本沼虾肝胰腺丙二醛含量(MDA)最低，显著低于对照组(P＜0.05);各组日本沼虾肝胰腺组织超氧化物酶活性(SOD)无显著差异(P＞0.05);胆固醇添加水平9.0g kg-1组日本沼虾碱性磷酸酶活性(AKP)和酸性磷酸酶活性(ACP)活性最高，显著高于其他组(P＜0.05)。实验结果表明。摄食胆固醇添加水平为8.70～9.99g kg-1饲料的日本沼虾获得了最佳的生长性能和饲料利用率，且13本沼虾肝胰腺的非特异性免疫指标处于最适水平。
2.饲料中胆固醇与磷脂对日本沼虾生长性能及免疫指标的交互作用
实验设计了三个胆固醇添加水平(低胆固醇组0g kg-1、中胆固醇组10g kg-1和高胆固醇组20g kg-1)和三个磷脂添加水平(低磷脂组0g kg-1、中磷脂组20g kg-1和高磷脂组40g kg-1)，采用3×3双因素交互设计，配制九组实验饲料投喂13本沼虾(初始体重0.15±0.01g)，每组饲料设3个重复，每个重复50尾虾，实验养殖周期56d，旨在探讨饲料中胆固醇和磷脂交互作用对日本沼虾生长性能及非特异性免疫指标的影响。研究发现，不同胆固醇水平组日本沼虾的存活率(SR)之间无显著的差异(P＞0.05):不同胆固醇水平组日本沼虾末均重(FBW)、WG和SGR存在显著差异(P＜0.05)。不同磷脂水平组日本沼虾SR、FBW、WG和SGR无显著差异(P＞0.05)。胆固醇和磷脂的交互效应对日本沼虾FBW影响较显著(P＜0.05)，而对日本沼虾SR、WG和SGR无显著影响(P＞0.05)。不同胆固醇水平组日本沼虾SOD、GSH-Px、AKP和ACP各指标均存在显著差异(P＜0.05);不同磷脂水平组日本沼虾SOD、GSH-Px、AKP和ACP各指标均无显著差异(P＞0.05);胆固醇和磷脂的交互效应对日本沼虾肝胰腺SOD、GSH-Px、AKP和ACP等非特异性免疫指标的影响均较显著(P＜0.05)。结果表明，饲料胆固醇和磷脂在日本沼虾生长性能方面的交互作用无显著体现;胆固醇和磷脂的交互作用对日本沼虾肝胰腺非特异性免疫指标影响作用显著，结合饲料磷脂对日本沼虾的生长性能和非特异性免疫指标的影响作用不显著，而饲料胆固醇的影响较显著，分析认为胆固醇在日本沼虾的生长性能和非特异免疫指标方面可能起着更为重要的作用。
3.饲料不同胆固醇添加水平对日本沼虾基因表达的影响
分别对投喂高、低两组胆固醇添加水平饲料(15.0和0.0g kg-1)的日本沼虾肠道、肝胰腺和肌肉等六个可能与胆固醇营养相关的组织进行了转录组比较分析，旨在探索日本沼虾饲料胆固醇营养相关的代谢通路和功能基因。通过测序和筛选，分别从肌肉、肠和肝胰腺组织中获得了大约44.64、506.2和44.88万条清洁数据:通过数据拼接共获得230946个Unigene。以低胆固醇饲料组日本沼虾相应组织为对照。依次从肠道转录组中获得346个差异表达基因，其中上调基因165个，下调基因181;从肝胰腺转录组中获得差异表达基因776个，舍上调基因494个，下调基因282个;从肌肉转录组中获得差异表达基因2069，包括上调基因1815个，下调基因2540分析这些基因可能与胆固醇的营养功能相关。
此外，通过对富集的营养代谢通路的进一步分析，发现了胆固醇营养显著相关的重要通路，包括1)细胞色素P450通路;2)维生素代谢(如视黄醇、抗坏血酸)和生物合成(如叶酸、泛酸和辅酶A)通路;3)11旨肪酸代谢和生物合成相关通路:4)免疫相关的通路，如抗原加工与呈现、吞噬体、溶酶体、谷胱甘肽代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢等。
4.FAS基因和ERP基因的克隆、序列特征、组织表达模式及对饲料不同胆固醇水平的表达响应规律
根据基因的功能注释，从构建的日本沼虾胆固醇营养相关转录组文库中所得到的差异基因中挑选出两种重要的功能基因脂肪酸合成酶基因(FAS)和蜕皮激素调节蛋白基因(ERP)，对其高度同源的序列进行克隆、序列分析、组织表达模式以及饲料不同胆固醇水平的表达响应规律探讨，以对这两个功能基因的结构、特征及表达规律进行初步认识和探索。
4.1实验通过RACE克隆技术对从日本沼虾胆固醇营养相关转录组文库中筛选得到的FAS中间序列，分别进行5’端和3’端片段的扩增。根据DNAMAN软件拼接日本沼虾FAS中间序列、5’端和3’端扩增片段的测序结果获得日本沼虾FAS基因cDNA全序列。序列全长为8989bp包含7320bp的开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)，编码2439个氨基酸残基(Amino acid residues，aas);5’和3’端非编码区(Untranslated Regions，UTR)序列长度分别为96bp和1573bp。根据功能结构域预测分析可知，FAS蛋白舍有3个保守结构域，分别是PKS结构域、FabD结构域和enoyl_red结构域。FAS氨基酸序列与凡纳滨对虾相似度最高，为68％;与榕小蜂(Ceratosolen solmsi marchali)和光屑星天牛(Anoplophora glabripennis)的相似度分别为48％、47％。通过系统进化树分析，日本沼虾和凡纳滨对虾进化关系最近。
日本沼虾脂肪酸合成酶基因(FAS)在肝胰腺中的表达量显著高于其他各组织中的表达量(P＜0.05)。与对照组相比，日本沼虾摄食添加胆固醇水平为3.0和6.0g kg-1饲料后，肝胰腺中FAS基因表达量显著下降(P＜0.05);随着胆固醇添加水平的进一步增加，肝胰腺中FAS基因表达量又呈现逐渐上升的变化趋势，15.0g kg-1胆固醇添加组日本沼虾肝胰腺中FAS基因表达量显著高于其他组(P＜0.05)。结果表明，FAS在肝胰腺中具有较高的表达特异性，且在肝胰腺中的表达水平受饲料胆固醇水平的调控。
4.2实验通过RACE克隆技术对从日本沼虾胆固醇营养相关转录组文库中筛选到的剧妒基因中间序列分别进行5’端和3’端片段扩增。根据DNAMAN软件拼接Et本沼虾ERP基因中间序列、5’端和3’端扩增片段的测序结果，获得日本沼虾ERP基因cDNA全序列。序列全长为885bp，包含444bp的ORF，编码147个aas;5’UTR和3’UTR序列长度分别为73bp和368bp。日本沼虾ERP蛋白序列中20-144位点之间具有保守结构域:ML(MD-2-related lipid-recognition)家族的Niemann-Pick type C2(Npc2)结构域。E即编码的氨基酸序列与凡纳滨对虾、中华绒螯蟹蛋白序列相似度分别为53％和47％，与裸盖鱼、半滑舌鳎的相似度分别为35％和35％;与其它脊椎动物的序列相似性比较低。通过系统进化树分析。日本沼虾与凡纳滨对虾以及中华绒螯蟹进化关系最近。
日本沼虾蜕皮激素调节蛋白基N(ERP)在表皮中的表达量显著高于除肝胰腺外的其他组织中表达量(P＜0.05);在肝胰腺中的表达量显著高于表皮及其他组织中的表达量(P＜0.05)。ERP基因在日本沼虾肝胰腺中的表达量分别是在表皮和眼柄中表达量的10.5和26.5倍。与对照组相比，日本沼虾摄食添加胆固醇的饲料后，肝胰腺中ERP基因的表达量显著升高(P＜0.05);胆固醇添加水平为9.0g kg-1组，肝胰腺中ERP表达量最高;随着胆固醇添加水平的进一步提高，ERP表达量呈现下降趋势，胆固醇添加水平为15.0g kg-1组E即表达量显著低于9.0g kg-1添加组(P＜0.05)。结果表明，日本沼虾ERP在表皮和肝胰腺中的表达量较高，且在肝胰腺中的表达水平受饲料胆固醇水平的调控。
综上所述，本论文通过不同胆固醇添加水平的饲料投喂日本沼虾，确定了日本沼虾饲料中胆固醇的最适添加量范围为8.70～9.99g kg-1;通过采用3×3双因素投喂实验，阐明了胆固醇和磷脂对日本沼虾生长性能的交互作用不显著(P＞0.05);胆固醇和磷脂对日本沼虾免疫指标的交互作用较显著;构建了胆固醇诱导的日本沼虾肠、肝胰腺和肌肉组织转录组文库，并通过转录组测序结果的比较研究。筛选获得了胆固醇营养显著相关的代谢通路和功能基因;对从文库中筛选到的FAS和ERP中间中间序列成功进行了RACE克隆，获得了两个基因的cDNA全序列，并通过实验揭示了上述两个基因在不同组织的表达模式及对饲料胆固醇水平的表达响应规律。本文的研究结果不仅有助于日本沼虾胆固醇营养需求数据的完善，也为进一步研究甲壳动物胆固醇营养需求的分子机制及相关的功能基因奠定遗传学基础。
已有的研究表明，胆固醇和磷脂是甲壳动物两种重要的营养元素。研究人员已对斑节对虾(Penaeus monodon)、锯缘青蟹(Scylla serrate)等水产甲壳动物胆固醇营养需求量进行过广泛研究，且已发现磷脂可能对甲壳动物胆固醇的营养作用存在影响。迄今，有关日本沼虾胆固醇营养需求及磷脂与胆固醇是否存在影响等未见报道。且很少对胆固醇的营养相关功能基因进行探讨。
本文以日本沼虾为研究对象，通过胆固醇单因素添加水平投喂试验，以确定日本沼虾饲料中胆固醇的最适添加量;同时，介于磷脂可能对胆固醇的营养具有重要的影响，开展了胆固醇与磷脂的双因素不同添加水平的投喂实验研究;采用高通量测序技术，构建日本沼虾不同胆固醇添加水平的营养转录组文库并对其进行比较研究，并在同源分析和差异表达量比较分析的基础上筛选胆固醇营养相关的功能基因，并从中挑选了两个重要的功能基因(FAS基因和ERP基因)进行研究;运用RACE克隆技术、荧光定量PCR及不同胆固醇添加水平的投喂实验等。对筛选得到的胆固醇营养相关功能基因进一步探讨其与胆固醇营养功能相关的关系。
1.饲料中添加不同水平胆固醇对日本沼虾生长、饲料利用、体组成及免疫指标的影响
设计了六种等脂(8％粗脂肪)、等蛋白(40％粗蛋白)饲料，饲料中胆固醇的添加水平依次为0、3.0、6.0、9.0、12.0和15.0g kg-1(添加胆固醇后的饲料总胆固醇的实测含量分别为2.8、5.6、8.7、11.5、14.8和17.6g·kg-1)，对日本沼虾(初始体重0.17±0.03g)进行为期8周的饲养实验，以探讨饲料不同胆固醇添加水平对日本沼虾生长性能、饲料利用及非特异性免疫相关指标的影响。结果发现，当饲料中胆固醇的添加量达到9.0g kg-1时，日本沼虾增重率(WG)和特定生长率(SGR)最大，并显著高于对照组(P＜0.05);胆固醇添加水平为6.0g kg-1和9.0g kg-1的两组饲料的饲料系数(FCR)显著低于其他各组(P＜0.05)。通过二次回归分析可知，日本沼虾获得最高WG和SGR时，日本沼虾饲料最适胆固醇添加水平分别为9.99g kg-1和8.70g kg-1。各组间虾体水分、粗蛋白及脂肪含量差异均不显著(P＞0.05)。饲料胆固醇添加水平9.0g kg-1组日本沼虾肝胰腺总抗氧化能力(TAC)最大、且显著高于对照组和3.0g kg-1添加水平组(P＜0.05):饲料胆固醇添加水平9.0g kg-1组，日本沼虾肝胰腺谷胱甘肽过氧化物酶活力(GSH-Px)显著高于其他组(P＜0.05);9.0g kg-1和12.0g kg-1胆固醇添加组日本沼虾过氧化氢酶活性(CAT)显著高于对照组(P＜0.05);饲料胆固醇添加水平9.0g kg-1组，日本沼虾肝胰腺丙二醛含量(MDA)最低，显著低于对照组(P＜0.05);各组日本沼虾肝胰腺组织超氧化物酶活性(SOD)无显著差异(P＞0.05);胆固醇添加水平9.0g kg-1组日本沼虾碱性磷酸酶活性(AKP)和酸性磷酸酶活性(ACP)活性最高，显著高于其他组(P＜0.05)。实验结果表明。摄食胆固醇添加水平为8.70～9.99g kg-1饲料的日本沼虾获得了最佳的生长性能和饲料利用率，且13本沼虾肝胰腺的非特异性免疫指标处于最适水平。
2.饲料中胆固醇与磷脂对日本沼虾生长性能及免疫指标的交互作用
实验设计了三个胆固醇添加水平(低胆固醇组0g kg-1、中胆固醇组10g kg-1和高胆固醇组20g kg-1)和三个磷脂添加水平(低磷脂组0g kg-1、中磷脂组20g kg-1和高磷脂组40g kg-1)，采用3×3双因素交互设计，配制九组实验饲料投喂13本沼虾(初始体重0.15±0.01g)，每组饲料设3个重复，每个重复50尾虾，实验养殖周期56d，旨在探讨饲料中胆固醇和磷脂交互作用对日本沼虾生长性能及非特异性免疫指标的影响。研究发现，不同胆固醇水平组日本沼虾的存活率(SR)之间无显著的差异(P＞0.05):不同胆固醇水平组日本沼虾末均重(FBW)、WG和SGR存在显著差异(P＜0.05)。不同磷脂水平组日本沼虾SR、FBW、WG和SGR无显著差异(P＞0.05)。胆固醇和磷脂的交互效应对日本沼虾FBW影响较显著(P＜0.05)，而对日本沼虾SR、WG和SGR无显著影响(P＞0.05)。不同胆固醇水平组日本沼虾SOD、GSH-Px、AKP和ACP各指标均存在显著差异(P＜0.05);不同磷脂水平组日本沼虾SOD、GSH-Px、AKP和ACP各指标均无显著差异(P＞0.05);胆固醇和磷脂的交互效应对日本沼虾肝胰腺SOD、GSH-Px、AKP和ACP等非特异性免疫指标的影响均较显著(P＜0.05)。结果表明，饲料胆固醇和磷脂在日本沼虾生长性能方面的交互作用无显著体现;胆固醇和磷脂的交互作用对日本沼虾肝胰腺非特异性免疫指标影响作用显著，结合饲料磷脂对日本沼虾的生长性能和非特异性免疫指标的影响作用不显著，而饲料胆固醇的影响较显著，分析认为胆固醇在日本沼虾的生长性能和非特异免疫指标方面可能起着更为重要的作用。
3.饲料不同胆固醇添加水平对日本沼虾基因表达的影响
分别对投喂高、低两组胆固醇添加水平饲料(15.0和0.0g kg-1)的日本沼虾肠道、肝胰腺和肌肉等六个可能与胆固醇营养相关的组织进行了转录组比较分析，旨在探索日本沼虾饲料胆固醇营养相关的代谢通路和功能基因。通过测序和筛选，分别从肌肉、肠和肝胰腺组织中获得了大约44.64、506.2和44.88万条清洁数据:通过数据拼接共获得230946个Unigene。以低胆固醇饲料组日本沼虾相应组织为对照。依次从肠道转录组中获得346个差异表达基因，其中上调基因165个，下调基因181;从肝胰腺转录组中获得差异表达基因776个，舍上调基因494个，下调基因282个;从肌肉转录组中获得差异表达基因2069，包括上调基因1815个，下调基因2540分析这些基因可能与胆固醇的营养功能相关。
此外，通过对富集的营养代谢通路的进一步分析，发现了胆固醇营养显著相关的重要通路，包括1)细胞色素P450通路;2)维生素代谢(如视黄醇、抗坏血酸)和生物合成(如叶酸、泛酸和辅酶A)通路;3)11旨肪酸代谢和生物合成相关通路:4)免疫相关的通路，如抗原加工与呈现、吞噬体、溶酶体、谷胱甘肽代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢等。
4.FAS基因和ERP基因的克隆、序列特征、组织表达模式及对饲料不同胆固醇水平的表达响应规律
根据基因的功能注释，从构建的日本沼虾胆固醇营养相关转录组文库中所得到的差异基因中挑选出两种重要的功能基因脂肪酸合成酶基因(FAS)和蜕皮激素调节蛋白基因(ERP)，对其高度同源的序列进行克隆、序列分析、组织表达模式以及饲料不同胆固醇水平的表达响应规律探讨，以对这两个功能基因的结构、特征及表达规律进行初步认识和探索。
4.1实验通过RACE克隆技术对从日本沼虾胆固醇营养相关转录组文库中筛选得到的FAS中间序列，分别进行5’端和3’端片段的扩增。根据DNAMAN软件拼接日本沼虾FAS中间序列、5’端和3’端扩增片段的测序结果获得日本沼虾FAS基因cDNA全序列。序列全长为8989bp包含7320bp的开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)，编码2439个氨基酸残基(Amino acid residues，aas);5’和3’端非编码区(Untranslated Regions，UTR)序列长度分别为96bp和1573bp。根据功能结构域预测分析可知，FAS蛋白舍有3个保守结构域，分别是PKS结构域、FabD结构域和enoyl_red结构域。FAS氨基酸序列与凡纳滨对虾相似度最高，为68％;与榕小蜂(Ceratosolen solmsi marchali)和光屑星天牛(Anoplophora glabripennis)的相似度分别为48％、47％。通过系统进化树分析，日本沼虾和凡纳滨对虾进化关系最近。
日本沼虾脂肪酸合成酶基因(FAS)在肝胰腺中的表达量显著高于其他各组织中的表达量(P＜0.05)。与对照组相比，日本沼虾摄食添加胆固醇水平为3.0和6.0g kg-1饲料后，肝胰腺中FAS基因表达量显著下降(P＜0.05);随着胆固醇添加水平的进一步增加，肝胰腺中FAS基因表达量又呈现逐渐上升的变化趋势，15.0g kg-1胆固醇添加组日本沼虾肝胰腺中FAS基因表达量显著高于其他组(P＜0.05)。结果表明，FAS在肝胰腺中具有较高的表达特异性，且在肝胰腺中的表达水平受饲料胆固醇水平的调控。
4.2实验通过RACE克隆技术对从日本沼虾胆固醇营养相关转录组文库中筛选到的剧妒基因中间序列分别进行5’端和3’端片段扩增。根据DNAMAN软件拼接Et本沼虾ERP基因中间序列、5’端和3’端扩增片段的测序结果，获得日本沼虾ERP基因cDNA全序列。序列全长为885bp，包含444bp的ORF，编码147个aas;5’UTR和3’UTR序列长度分别为73bp和368bp。日本沼虾ERP蛋白序列中20-144位点之间具有保守结构域:ML(MD-2-related lipid-recognition)家族的Niemann-Pick type C2(Npc2)结构域。E即编码的氨基酸序列与凡纳滨对虾、中华绒螯蟹蛋白序列相似度分别为53％和47％，与裸盖鱼、半滑舌鳎的相似度分别为35％和35％;与其它脊椎动物的序列相似性比较低。通过系统进化树分析。日本沼虾与凡纳滨对虾以及中华绒螯蟹进化关系最近。
日本沼虾蜕皮激素调节蛋白基N(ERP)在表皮中的表达量显著高于除肝胰腺外的其他组织中表达量(P＜0.05);在肝胰腺中的表达量显著高于表皮及其他组织中的表达量(P＜0.05)。ERP基因在日本沼虾肝胰腺中的表达量分别是在表皮和眼柄中表达量的10.5和26.5倍。与对照组相比，日本沼虾摄食添加胆固醇的饲料后，肝胰腺中ERP基因的表达量显著升高(P＜0.05);胆固醇添加水平为9.0g kg-1组，肝胰腺中ERP表达量最高;随着胆固醇添加水平的进一步提高，ERP表达量呈现下降趋势，胆固醇添加水平为15.0g kg-1组E即表达量显著低于9.0g kg-1添加组(P＜0.05)。结果表明，日本沼虾ERP在表皮和肝胰腺中的表达量较高，且在肝胰腺中的表达水平受饲料胆固醇水平的调控。
综上所述，本论文通过不同胆固醇添加水平的饲料投喂日本沼虾，确定了日本沼虾饲料中胆固醇的最适添加量范围为8.70～9.99g kg-1;通过采用3×3双因素投喂实验，阐明了胆固醇和磷脂对日本沼虾生长性能的交互作用不显著(P＞0.05);胆固醇和磷脂对日本沼虾免疫指标的交互作用较显著;构建了胆固醇诱导的日本沼虾肠、肝胰腺和肌肉组织转录组文库，并通过转录组测序结果的比较研究。筛选获得了胆固醇营养显著相关的代谢通路和功能基因;对从文库中筛选到的FAS和ERP中间中间序列成功进行了RACE克隆，获得了两个基因的cDNA全序列，并通过实验揭示了上述两个基因在不同组织的表达模式及对饲料胆固醇水平的表达响应规律。本文的研究结果不仅有助于日本沼虾胆固醇营养需求数据的完善，也为进一步研究甲壳动物胆固醇营养需求的分子机制及相关的功能基因奠定遗传学基础。