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自从神经导向因子Netrin-1/Unc5b调控系统参与血管生长的导向控制被证实以来,血管系统的生长发育存在与神经生长发育类似的导向控制分子机制成为新的认识。神经导向因子及其受体组成的分子系统主要包括:Netrin/Unc-DCC,Slit/Robo,Semaphorin/Plexin-Nrp和Ephrin/Eph四种配体/受体系统。在这些系统的配体和受体家族中,目前仅有部分成员在参与血管发育的调节作用被发掘。对神经导向分子在血管系统中的作用,尚无全面系统的详实资料。
血管的生成是血管内皮细胞与其周围组织细胞相互作用的结果,血管生长的调节主要通过血管生长调节因子作用于血管内皮细胞上的相应受体进行。为了系统了解神经导向分子在血管系统中的作用,发掘新的血管生长控制机制,我们采用鸡胚作为模式动物对神经导向系统受体在内皮细胞中的表达情况进行分析。首先通过半定量PCR分析检测神经导向受体在鸡血管内皮及其前体细胞以及三日龄鸡胚全胚细胞中的表达情况,初步筛选出8种在血管内皮及其前体细胞中相对特异或高调表达的受体:Nrp2,EphB1,EphA5,EphA3,PlexinD1,A2B,Robo4,Unc5c。接着,我们采用原位杂交技术,研究了这些基因在发育鸡胚的活体动态表达请况。这些数据,为进一步研究神经导向分子在血管系统中的作用,提供了新的依据。
在我们筛选出的神经导向分子受体中,EphB1在血管发育中的功能研究鲜有报道。我们成功构建了EphB1基因的慢病毒干扰载体,通过在人的脐带内皮细胞(HUVEC及HUAEC)和发育鸡胚中实施有效地RNA干扰,进一步对该基因在血管生成中的作用进行了研究。结果表明,EphB1对血管内皮细胞的增殖无明显影响,但在内皮细胞的迁移和管状形成中发挥了一定的作用;在早龄鸡胚中对EphBl进行有效的RNA干扰,鸡胚卵黄膜血管发育受损。因此,我们揭示了EphB1在血管发育中发挥了一定的作用。