【摘 要】
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为了应对粮食短缺、农药和化肥等引起的环境问题,转基因作物的种植面积逐年增加。以苏云金芽孢杆菌Cry毒素作为杀虫剂的转基因植物目前已经得到广泛研究。Cry1C作为一种新兴的Cry蛋白,受到极大的关注。常规的Cry毒素检测方法需要使用大型仪器,如高效液相色谱仪,这种方法具有高灵敏度的优点,但是也存在着操作负载、高成本、检测耗时长的不足。此外,由于Cry1C转基因的不断增长以及Cry毒素潜在的健康和环境
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为了应对粮食短缺、农药和化肥等引起的环境问题,转基因作物的种植面积逐年增加。以苏云金芽孢杆菌Cry毒素作为杀虫剂的转基因植物目前已经得到广泛研究。Cry1C作为一种新兴的Cry蛋白,受到极大的关注。常规的Cry毒素检测方法需要使用大型仪器,如高效液相色谱仪,这种方法具有高灵敏度的优点,但是也存在着操作负载、高成本、检测耗时长的不足。此外,由于Cry1C转基因的不断增长以及Cry毒素潜在的健康和环境问题,因此,亟需开发一种经济、简单且稳健的检测方法以快速和灵敏地检测水稻样品中Cry1C蛋白的含量。本论文建立了基于双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（DAS-ELISA）和基于磁珠的免疫测定法来检测Cry1C,并应用于水稻样品的检测。首先,培养两个可以产生Cry1C单克隆抗体细胞系C1和C4,并将其注入小鼠腹腔中通过小鼠腹水生产单克隆抗体。在本论文中,作者选择C1细胞株产生的单抗作为捕获抗体,C4细胞株产生的单抗用辣根过氧化物酶（HRP）标记后作为检测抗体。最终通过3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）及和辣根过氧化物酶（H2O2）显色,酶标仪测定在OD450吸收峰来定量检测Cry1C含量。基于此,本课题建立了以下两种Cry1C蛋白的免疫测定方法:（1）基于夹心ELISA方法用于Cry1C检测:检测限为10 ng/m L（S/N=3.0）,线性范围为10–120 ng/m L。本实验所建立的ELISA表现出良好的稳定性（相对标准偏差为4.43%）并成功应用于实际样品的检测;（2）基于磁珠的高灵敏度免疫方法用于Cry1C检测。本方法检测限为1 ng/m L（S/N=3.0）,线性检测范围为1–13 ng/m L。该方法显示出较好的稳定性（相对标准偏差为2.75%）。此外,该方法进一步成功地用于检测实际样品的Cry 1C蛋白。
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