奥利万星（商品名:Orbactiv）是近年来新上市的继万古霉素和替考拉宁等第一代糖肽类抗生素后的新型半合成糖肽类抗生素,用于革兰氏阳性菌（包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,MRSA）导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染（ABSSSIs）的治疗,其优点为对耐药菌有效、半衰期长、给药方便等。奥利万星的合成需要关键中间体A82846B,主要由微生物发酵法得到,产生菌包括东方拟无枝酸菌（Amycolatopsis orientalis）和荒漠拟包囊菌（Kibdelosporangium aridum）。目前两种菌种的产量都较低,并且在发酵过程中会产生两种结构类似的副产物:A82846A和A82846C。这两种副产物和A82846B的结构差别仅为氯原子取代数量的不同,导致后期分离困难,增加分离纯化成本。本文以实验室菌株荒漠拟包囊菌ZH04为研究对象,利用菌种选育、发酵工艺优化等手段,以期进一步提高发酵效率,提高目标产物产量。本文主要结果如下:1.以ZH04为亲本菌株,利用经典的物理诱变方法紫外诱变、常温室压等离子体诱变（ARTP）结合自然筛选、抗性筛选和核糖体工程进行一系列菌株诱变选育,最终得到了高产菌株ZH04-PC-21和ZH04-PC-13。经摇瓶发酵和HPLC检测后发现,ZH04-PC-21相比亲本菌株,目标产物A82846B产量提高了110%,两种结构相似副产物中,A82846A提高了160%,A82846C提高了52%;ZH04-PC-13相比亲本菌株提高A82846B提高了61%,A82846A提高了130%,A82846C提高了36%。相比于目标产物,一氯代副产物A82846A的产量提升最多,可为实验室后续分子改造氯化途径奠定基础。2.通过发酵工艺的优化,菌株的摇瓶发酵单位相比优化前A82846B组分产量提高了128%,达到373.20 mg/L,;A82846A组分产量提高了176%,达到968.72mg/L;A82846C组分产量提高了163%,达到159.07mg/L。对发酵培养基组成成分（碳源、氮源、微量元素）及发酵工艺（接种时间、初始p H,装液量、接种量、剪切力、装液量）进行优化,最终得到ZH04发酵培养基最佳组分:葡萄糖、玉米淀粉、黄豆粉、酵母浸粉、糖蜜、碳酸钙、Cu SO4·7H2O,摇瓶发酵培养条件为:初始p H 7.5、接种时间48 h、接种量10%、装液量25 m L,培养温度28℃、摇床转速220 rpm。并且发现菌株ZH04对剪切力比较敏感,过大的剪切会影响次级代谢产物的合成,5-L发酵罐放大发酵的初探也证明菌株ZH04对溶氧和搅拌剪切敏感,可用于指导发酵放大。3.对高产菌株进行核糖体突变位点研究。核糖体工程根据抗性筛选的抗生素的不同,涉及的突变位点有区别。对诱变筛选出的突变菌株研究其与链霉素抗性相关的rps L和rsm G基因的突变情况,经基因扩增和测序后发现,突变菌株ZH04-PC-21的rsp L基因发生了一个突变,其第184位碱基由G突变为A,即第62位编码的氨基酸由谷氨酸（GAG）突变为赖氨酸（AAG）,推测此突变可能影响了次级代谢产物合成的相关调节蛋白,导致产物产量的提高。其余的突变菌株在两个基因上均没有检测到突变,需要进一步深入解析。