【摘 要】
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目的:通过重组pGRIM-19质粒在前列腺癌细胞PC-3M中的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖,进而促进其凋亡。方法:(1)免疫组织化学方法检测人前列腺癌组织中的GRIM-19的表达;(2)pGRIM
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目的:通过重组pGRIM-19质粒在前列腺癌细胞PC-3M中的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖,进而促进其凋亡。方法:(1)免疫组织化学方法检测人前列腺癌组织中的GRIM-19的表达;(2)pGRIM-19真核表达载体的构建;(3)细胞培养及重组质粒转染PC-3M细胞;(4)细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;(5)流式细胞术检测细胞周期;(6)RT-PCR检测转染细胞中GRIM-19 mRNA表达情况;(7)Western blot检测转染细胞中GRIM-19及相关凋亡因子的蛋白表达情况。结果:(1)免疫组化显示:正常和增生的前列腺癌组织中GRIM19的表达量明显高于癌组织;(2)成功构建pGRIM-19重组质粒,鉴定结果与预期结果完全一致;(3)RT-PCR检测:GRIM-19成功转染至PC-3M细胞中,转染组GRIM-19mRNA的含量明显高于对照组;(4)Western blot结果显示,转染pGRIM-19质粒的细胞内GRIM-19蛋白表达量明显增高;(5)MTT实验显示:重组质粒转染PC-3M细胞后,肿瘤细胞生长与对照组相比明显受到抑制;(6)流式细胞术检测发现pGRIM-19质粒促进了PC-3M细胞凋亡;(7)吖叮橙染色检测发现pGRIM-19质粒促进了PC-3M细胞凋亡;(8)Western blot结果显示相关的凋亡因子的表达量明显降低。结论:GRIM-19的高表达可抑制人前列腺癌PC-3M细胞生长,诱导前列腺癌细胞凋亡,为前列腺癌的治疗提供了新思路。
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