目的：T细胞淋巴瘤（T-cell lymphoma）是一种来源于T淋巴细胞的恶性克隆增殖性疾病。目前对其治疗主要是常规化疗，效果差且易复发，需寻找有效药物及其联合治疗方案以提高T细胞淋巴瘤患者的疗效改善预后。表观遗传学对肿瘤的治疗作用越来越受到关注，其中主要包括去甲基化治疗和组蛋白乙酰化治疗。国内外研究已证实淋巴瘤患者及其细胞系中存在异常的高度甲基化，经常发生于富于CpG岛的肿瘤抑制基因(如P15INK4B基因，SHP-l基因，P53基因)启动子区，并导致该基因的沉默。同时也发现存在组蛋白过度去乙酰化。地西他滨（decitabine，DAC)，是一种核苷类似物，磷酸化的地西他滨参与DNA合成，然后与DNA甲基转移酶（DNMTs）共价结合，抑制其活性，造成DNA低甲基化，激活抑癌基因引起细胞分化或凋亡。FDA已经正式批准地西他滨用于治疗骨髓增生异常综合征（MDS）。基础研究表明DAC能够诱导淋巴瘤细胞株Raji中P15INK4B基因去甲基化和表达增强，从而抑制肿瘤细胞增殖。丙戊酸钠(sodium vedproate,VPA)从1970年用于治疗癫痫。最近的研究显示，VPA可以抑制组蛋白去乙酰化酶，调节细胞周期，诱导肿瘤细胞凋亡，和抑制血管生成，对淋巴瘤亦有抗肿瘤作用。故DAC与VPA两者有联合用药的可能。为进一步明确地西他滨对淋巴瘤细胞增殖及促凋亡的机制，本实验选用人类T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株，观察地西他滨对Jurkat细胞增殖的抑制以及诱导凋亡作用，及VPA与DAC联合对上述作用的影响。并检测甲基化酶DNMT3AmRNA表达的变化，为T细胞淋巴瘤新的治疗方法提供理论依据。方法：1常规方法培养人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株，每24小时传代一次。选用对数期细胞进行试验。2MTT法检测不同浓度的地西他滨、丙戊酸钠单药及二者联合应用对Jurkat淋巴瘤细胞增殖的影响:DAC的浓度分别为10、50、100μmol/L，VPA的浓度分别为1、2、3mmol/L,DAC（10μmol/L)分别和VPA1、2、3mmol/L三个浓度联合,单药组分别作用24h、48h、72h观察Jurkat细胞的抑制率，联合用药组观察48hJurkat细胞的抑制率，并用金正均公式计算联合用药是协同作用还是拮抗作用，计算公式为： Q=EAB/（EA+EB-EAEB）。EA和EB为各药单用抑制率，EAB为两药合用抑制率。0.85≤Q≤1.15为相加作用，Q≥1.15为协同作用，≤0.85为拮抗作用。3AnnexinV/PI双染法检测不同浓度的地西他滨、丙戊酸钠单药及二者联合使用对Jurkat淋巴瘤细胞凋亡的影响,药物作用浓度同MTT实验，观察单药作用24h、48h、72h的凋亡率和联合用药24h的凋亡率；4半定量RT-PCR法检测地西他滨、丙戊酸钠单药及二者联合用药各组Jurkat细胞DNMTs mRNA表达的变化:药物作用浓度同MTT实验，观察单药作用24h、48h、72h的DNMTs mRNA表达量变化，联合用药作用48h的表达量变化；5统计学分析：SPSS13.0软件进行分析，分组资料的表示用均数±标准差，两组比较应用t检验，多组比较应用单因素方差分析，P＜0.05为有差异，提示有统计学意义。结果：1地西他滨对Jurkat细胞增殖抑制的影响不同浓度的DAC作用于Jurkat细胞24h、48h、72h后，发现随着药物作用浓度的增加和作用时间的延长，增殖抑制率由14.67%增加到80.6%，各处理组之间，以及处理组和对照组之间统计学分析，差异有统计学意义（P<0.05）。DAC抑制Jurkat细胞增殖，并呈时间、剂量依赖性。2丙戊酸钠对Jurkat细胞增殖抑制的影响不同浓度的丙戊酸钠作用于Jurkat细胞24h、48h、72h后，发现随着药物作用浓度的增加和作用时间的延长，增殖抑制率由14.47%增加到77.51%，各处理组之间，以及处理组和对照组之间统计学析，差异有统计学意义（P<0.05）。VPA抑制Jurkat细胞增殖也呈时间、剂量依赖性。3地西他滨对Jurkat细胞凋亡的影响流式细胞术分析结果显示，DAC作用于Jurkat细胞，随时间延长和药物浓度的增加，细胞凋亡率由18.9%增加到47.2%。统计学分析显示各处理组之间，处理组和对照组间均有统计学差异（P<0.05）DAC促Jurkat细胞凋亡呈时间剂量依赖性。4丙戊酸钠对Jurkat细胞凋亡的影响VPA作用于Jurkat细胞时，凋亡率由10.2%增加到43.2%,各处理组之间，处理组和对照组间统计分析有统计学意义（P<0.05），VPA促Jurkat细胞凋亡呈时间剂量依赖性。5地西他滨和丙戊酸钠联合作用于Jurkat细胞的增殖抑制和促凋亡作用：DAC（10μmol/L)和VPA1、2、3mmol/L联合作用于Jurkat细胞，48h的细胞生长抑制率与单药组比较有统计学差异(P﹤0.05)。Q值均介于0.85～1.15之间，说明了丙戊酸钠和地西他滨联合作用于Jurkat细胞时，为两药作用的单纯相加。提示地西他滨和丙戊酸钠联用可增强Jurkat细胞生长抑制效应。AnnexinV/PI双染法测三种联合作用下24h的凋亡率与单药比较有统计学意义(P﹤0.05)，提示联合作用可增加细胞的凋亡。6地西他滨和丙戊酸钠对DNMT3A mRNA表达的影响RT-PCR结果显示，10、50、100μmol/L三种不同浓度的地西他滨作用于Jurkat细胞24h~72h同对照组相比，DNMT3A mRNA平均表达水平随时间和药物浓度逐渐降低,表达量由0.67到0.30，各组比较有统计学差异（P<0.05)。1、2、3mmol/L三种不同浓度的丙戊酸钠作用于Jurkat细胞24h，48h,72h同对照组相比，DNMT3A mRNA表达水平随着丙戊酸钠药物浓度的增加和作用时间的延长无明显变化（P值>0.05）。丙戊酸钠作用于Jurkat细胞，各组细胞的甲基化转移酶DNMT3A mRNA表达水平相比较无统计学差异（P﹥0.05)。7丙戊酸钠增强地西他滨对Jurkat细胞的去甲基化作用RT-PCR结果显示，三种不同浓度的丙戊酸钠和10μmol/L地西他滨两药联合作用于Jurkat细胞48h后，Jurkat细胞甲基化转移酶DNMT3A mRNA表达减少，较单药作用时减少更明显，联合作用时DNMT3A mRNA表达量最大可降至0.26；与地西他滨单药作用时的0.33相比有统计学差异（P﹤0.05)。结论：1地西他滨抑制Jurkat淋巴瘤细胞增殖，并促进Jurkat细胞凋亡，呈时间和剂量依赖性。2丙戊酸钠以时间、剂量依赖性的方式抑制Jurkat淋巴瘤细胞增殖，促进其凋亡。3地西他滨能降低DNMT3AmRNA的表达量，并呈时间剂量依赖性。丙戊酸钠对Jurkat DNMT3A mRNA的表达无明显影响。4丙戊酸钠能促进地西他滨的抑制增殖和诱导凋亡作用，增强地西他滨对Jurkat淋巴瘤细胞的DNMT3A的减低作用，二者联合能增强Jurkat细胞对地西他滨的敏感性。