动物转基因研究是目前生物工程研究的热点内容之一,其特点是将外源基因导入动物或改变动物的遗传组成,并能稳定传代。转基因动物模型作为动物整体的研究体系,是基因功能研究、人类疾病发病机理、药物筛选和临床医学研究的理想工具。Mx（Myxovirus resistance）蛋白是由Ⅰ型（α/β）干扰素（IFN）诱导产生的具有GTP酶活性的发动蛋白超家族成员之一,通过对多种动物的Mx蛋白抗病毒研究发现,Mx蛋白具有广谱的抗病毒功能,已证明其具有抑制A型流感病毒、Thogoto病毒、水泡性口膜炎病毒等复制的作用。在本研究中,我们将在分子特征和细胞水平证明具有抗流感病毒活性的Mx基因导入小鼠,期望获得能持续稳定表达Mx蛋白且具有抗流感病毒作用的转基因小鼠模型,为基因功能研究提供条件。本研究首先构建了鸡Mx基因的重组质粒pProExHTa-Mx,转化大肠杆菌BL21,诱导表达,以切胶纯化方式回收Mx融合蛋白,加佐剂乳化,免疫新西兰白兔制备抗血清,SDS-PAGE和Western blot结果表明:Mx基因在大肠杆菌中以融合蛋白形式稳定表达,表达产物的相对分子量约80 kDa,与预期值相符;抗血清能与Mx蛋白发生特异性反应。用真核表达重组质粒pcDNA3.1-Mx转染293T细胞,间接免疫荧光试验结果表明:原核表达蛋白免疫动物制备的抗血清与真核表达的Mx蛋白发生良好的免疫反应,表明用原核表达的Mx蛋白具有真核表达Mx蛋白相似的免疫学活性。在本研究组已获得F1代Mx转基因小鼠的基础上,将转基因小鼠与野生型小鼠交配繁育,出生的小鼠通过PCR和Southern blot检测获得29只F2代Mx转基因阳性小鼠,经表达谱分析,转基因小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和肌肉中均有Mx mRNA表达,间接免疫荧光试验表明:转基因小鼠的肺和肝脏中有Mx蛋白表达。同样方法,我们分别获得了44只F3代和19只F4代Mx转基因小鼠。这些结果表明:成功建立了Mx转基因小鼠模型,目的基因能够在小鼠稳定遗传和表达。为了在转基因小鼠模型的动物整体水平评价Mx蛋白抗禽流感病毒的作用,本研究设立F3代Mx转基因小鼠和野生型ICR小鼠两个试验组。用200LD50剂量的H5N1禽流感病毒经鼻腔感染,以小鼠临床症状、肺组织中禽流感病毒含量、体重变化、病理变化以及小鼠存活率来评价。结果表明,攻毒后Mx转基因鼠表现症状轻,肺组织病毒比对照组低2.5倍,体重损失少,病理变化比正常野生型小鼠轻,存活率为30%,而对照组小鼠全部死亡。表明:转基因小鼠具有显著的抗禽流感病毒作用。通过该研究,我们获得了能持续稳定表达Mx蛋白的转基因小鼠模型,为Mx蛋白的抗病毒功能验证提供条件;同时通过转基因小鼠模型在动物整体水平上验证了Mx蛋白具有抗禽流感病毒的作用,为制备具有广谱抗病毒作用的Mx转基因动物奠定基础。