RNA干扰沉默LSD1基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡的研究

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目的:研究LSD1蛋白、组蛋白H3K4一、二甲基化在套细胞淋巴瘤中异常表达及其意义,寻找套细胞淋巴瘤分子治疗的新标靶;应用小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)沉默套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1的LSD1基因,了解干扰LSD1对Jeko-1细胞增殖和凋亡的作用,以及对组蛋白甲基化影响,探讨套细胞淋巴瘤基因治疗的新方法。方法:1、免疫组织化学方法检测LSD1蛋白、组蛋白H3K4一、二甲基化在套细胞淋巴瘤中的表达差异。2、设计LSD1siRNA片段,经LipofectamineTM2000脂质体转染Jeko-1细胞后,RT-PCR检测LSD1mRNA转录水平的变化,筛选出最佳的siRNA片段。3、应用四唑盐(MTT)法绘制细胞生长曲线、流式细胞术分析细胞调亡。4、Western blot检测LSD1siRNA作用后凋亡相关蛋白Bcl-2、CyclinD1、C-myc表达水平的变化,以及LSD1蛋白表达的变化、组蛋白H3K4甲基化状态变化。结果:1、与淋巴结反应性增生比较,套细胞淋巴瘤LSD1蛋白表达增加、组蛋白H3K4一、二甲基化表达下降, p<0.01,有显著性差异。2、转染后LSD1的mRNA表达明显减弱,且随着浓度的提高,干扰效率也逐渐上升。3、LSD1siRNA能明显抑制Jeko-1细胞的增殖,作用24小时的半数抑制浓度(IC50)约为60nM,LSD1siRNA抑制Jeko-1细胞增殖周期,促进凋亡,且随着浓度增加及作用时间延长,作用加强。4、转染24小时后细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、CyclinD1及原癌基因C-myc的表达下降。5、LSD1siRNA可引起Jeko-1细胞的LSD1蛋白表达水平的降低,同时增加组蛋白H3K4一、二甲基化。结论:1、套细胞淋巴瘤中LSD1蛋白呈高表达,组蛋白H3K4me1和H3K4me2呈低表达,提示LSD1蛋白、组蛋白H3K4可能与套细胞淋巴瘤的发生有关。2、RNAi技术有效地干扰套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞中LSD1的表达,导致细胞增殖率下降、凋亡率上升。3、干扰LSD1后可上调组蛋白H3K4一甲基化和二甲基化。提示RNAi技术可以成为套细胞淋巴瘤靶向基因治疗的新方法,同时LSD1基因可能成为靶向治疗的新靶点。
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