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目的:本研究旨在细胞水平上,探讨miR-29b在脑缺血/再灌注损伤情况下的表达变化和在神经细胞凋亡中的作用,以及miR-29b抑制物对脑神经是否存在保护作用,并阐明其可能存在的机制。方法:体外培养小鼠来源的神经瘤母细胞(N2a细胞),随机分为六组,空白对照组(control组),糖氧剥夺/再灌注组(OGD/R组),转染miR-29b激动物+糖氧剥夺/再灌注组(mimics组),转染miR-29b抑制物+糖氧剥夺/再灌注组(inhibitor组),转染miR-29b激动物阴性对照+糖氧剥夺/再灌注组(mimics NC组),转染miR-29b抑制物阴性对照+糖氧剥夺/再灌注组(inhibitor NC组),通过建立糖氧剥夺/再灌注模型,模拟体外脑缺血损伤,然后通过RT-q PCR方法检测miR-29b在各组中的表达量是否存在差异;CCK-8法检测细胞存活率;Annexin V FITC/PI流式双染法检测细胞凋亡情况;Western blot检测Mcl-1、Bcl-2及caspase-3蛋白表达量在各组的情况;荧光素酶实验验证miR-29b与Mcl-1的作用关系。结果:(1)与空白对照组相比,N2a细胞在糖氧剥夺/再灌注损伤后miR-29b表达量增高(P<0.05);(2)转染miR-29b模拟物使miR-29b过表达后,可加重糖氧剥夺/再灌注损伤,使N2a细胞的凋亡率增加、细胞活力降低(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达下调、凋亡相关蛋白Caspase-3表达上调(P<0.01);转染miR-29b抑制物抑制miR-29b表达后,可有效减少糖氧剥夺/再灌注损伤的N2a细胞凋亡率、增强细胞活力(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达上调、凋亡相关蛋白Caspase-3表达下调(P<0.05);(3)双荧光素酶实验结果示转染miR-29b模拟物后,含野生型Mcl-1 3’UTR端的荧光报告质粒的荧光表达强度明显降低。结论:在脑缺血/再灌注损伤中,miR-29b对神经有损伤作用,而miR-29b抑制物对神经存在保护作用,其可能的机制是通过抑制miR-29b与靶基因Mcl-1直接结合来发挥脑保护作用。