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在全球环境恶化和能源危机日益严峻的今天,乙醇作为一种可利用的绿色能源,正逐渐成为各国能源发展的重点。酵母菌作为乙醇工业生产中不可或缺的微生物资源,对生产过程中乙醇的产量起着重要的作用。因此,本课题拟从以下三方面进行研究。1.分离纯化及初步鉴定本实验的样品来于四川9个地区的19个白酒厂将酒醅稀释一定浓度后涂布于含有抑菌剂的YEPD平板表面,培养后挑取176株具有典型酵母菌特征的菌株。各样品挑选1株代表菌株,共计19株,对其进行形态观察和生理生化鉴定,初步鉴定代表菌株均为酵母菌,分别属于4个种,其中酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)13株,盔形毕赤酵母(Pichia galeiformis)3株,季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)2株,尼泊尔德巴利酵母(Debaryomyces nepalensis)1株。2.酵母菌的分子鉴定通过26S rDNA D1/D2区域对100多株菌株进行分子鉴定,在分子生物学水平上进一步验证了初步鉴定的结果。对代表菌株进行rDNAITS序列分析,系统分析的结果表明,17株在ITS分子水平上鉴定到种,余下2株鉴定到属。此外,通过系统发育树初步分析了代表菌株间的系统演化关系。对代表菌株进行M13、(GTG)5指纹图谱分析,聚类分析结果表明来自不同样品的酵母菌有着较为丰富的遗传多样性。3.酵母菌的特性研究通过耐乙醇、耐糠醛、耐5-羟甲基糠醛和耐高温实验对代表菌株进行特性研究,同时描绘生长曲线来分析比较分属不同菌种优势菌间的特征。实验结果表明QWD01(酿酒酵母)具有较强的耐受能力,能耐受10%乙醇、30mM糠醛、90mM5-羟甲基糠醛以及43℃高温。本课题从白酒厂的酒醅中分离出优良酵母菌,丰富了燃料乙醇发酵微生物菌种数据资源库并为下一步分子机理研究以及与其它具有特殊功能菌株原生质体融合或现代化生物技术整合出具有应用价值的工程菌株提供重要的菌种资源。