滇重楼种子休眠特性及其不同居群植株生理差异研究

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目的:滇重楼作为名贵中药材,是云南白药、宫血宁等中成药的重要组成部分。由于滇重楼种子具有休眠特性、生长发育缓慢以及市场需求不断增长,野生滇重楼资源已经非常匮乏,人工栽培是解决其资源供给的主要手段。为滇重楼引种种植提供理论基础依据,实验对不同居群滇重楼光合生理、总皂苷含量进行了对比研究,并探索了滇重楼种子萌发过程中休眠解除的微观分子机制,以期为滇重楼引种种植及资源保护提供理论基础。方法:1、利用LI-6800光合作用仪,对云南省丽江市鲁甸乡、丽江市华坪县、大理州永平县、曲靖市马龙区、曲靖市麒麟区、曲靖市师宗县等6个重楼居群处于结实期的滇重楼进行光合作用研究,检测分析不同居群相同品种与相同居群不同来源滇重楼的光合生理的变化模式。2、通过HPLC对照《中国药典》记载方法,处理分析6个不同居群相同品种与相同居群不同来源滇重楼根茎的皂苷含量变化。3、利用高通量转录组测序技术,通过Illumina Hi Seq平台、RNA-seq手段,对不同萌发阶段滇重楼种子进行转录组测序。结果:1、滇西居群滇重楼的光合能力高于滇东南居群;滇西居群不同滇重楼品种间光合能力差异较大,滇东南居群不同种源滇重楼的光合速率差异不大。不同居群的滇重楼移栽到相同环境下,其叶片气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)以及水分利用效率(WUE)值均低于当地品种,而胞间CO2浓度与环境CO2浓度的比值(Ci/Ca)则高于当地品种,移栽后的品种光合能力低于当地品种。2、在6个不同居群中,采自大理州永平县的滇重楼根茎皂苷含量最高,采自曲靖市师宗县的滇重楼根茎皂苷含量最低。其他4个居群滇重楼根茎皂苷含量相差不大。在移栽到曲靖市师宗县的5个不同品种滇重楼根茎中,源自师宗县本地未经移栽的品种皂苷含量最低。3、通过高通量转录组测序手段,测得775732996个原始reads数,734535834个过滤后高质量reads数,110.19 G高质量碱基数。并且通过NR、GO、KOG、KEGG、Swiss-Prot、Trembl、Pfam等7个功能数据库共注释得到了103476个基因。且通过注释发现滇重楼基因与油棕、海枣、美洲栎的相似度超过10%。GO分类得到18个细胞成分、11个分子功能、28个生物学过程。KOG分类发现了一般功能预测的基因最多(2145),胞外结构基因最少(21)。通过软件处理,对比得到了种子萌发4个时期相互间共35239条差异基因。通过对不同萌发阶段滇重楼种子的高通量测序,发现了一些可能的参与种子休眠解除的关键基因,如GA3ox、GA20ox、ABI5、ABI3等。促进种子萌发GA激素的合成基因含量上调,抑制种子萌发ABA激素的合成基因下调。结论:研究认为,滇西地区所产滇重楼比滇东南地区光合作用能力更强,以大理州永平县滇重楼尤为突出,而移栽后的品种光合能力以及水分利用率低于当地品种。不同居群滇重楼根部皂苷含量差异不大,降雨量、温度、光照强度对植物造成的生理上的胁迫对其有效成分的积累影响较大,且移栽后的品种因其自身适应性也会产生不同程度上有效成分积累量的减少。通过对不同萌发阶段滇重楼种子的高通量测序,分类得到了多种生物学过程及其包含的差异基因数量,以及一些可能的参与种子休眠解除的关键基因,为后续滇重楼高通量测序实验奠定基础。
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