阿月浑子杂交亲和性及杂种胚挽救研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:linxi054
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本研究以阿月浑子和黄连木为材料,从形态解剖学、孢粉学和生理生化特性等方面系统开展了阿月浑子花期物候、雌雄配子体发育、花粉形态及萌发特性的研究,为进一步开展远缘杂交奠定了科学依据;以阿月浑子和黄连木杂交组合为研究对象,利用荧光显微观察和离体胚培养技术,探讨了远缘杂交授粉受精过程的特点、远缘杂交亲和性以及杂种胚败育进程,明确了杂种胚败育的关键时期和特点,建立了阿月浑子和黄连木远缘杂交的杂种胚挽救技术体系,对杂种F1代适应性进行了初步评价,并对阿月浑子和黄连木幼苗的耐盐性进行了系统研究。研究结果如下:1.阿月浑子雄株T-491和黄连木花序于3月20日左右开始发育,花序生长期持续约15d,而雌株Kerman的花序生长较晚,始于3月28日左右,花序生长期持续约20d。雌株Kerman初花期为4月9~10日,而阿月浑子雄株T-491的散粉物候期与雌株Kerman的花期在4月10~12日重叠3d。雄株黄连木散粉物候期与Kerman的花期在4月10~14日重叠5d。2.利用常规石蜡切片技术,对阿月浑子的大小孢子发生及雌雄配子体发育过程进行了观察,探讨在其发育过程中是否存在生殖障碍。结果表明:(1)花药壁由外向内分别为表皮、药室内壁、中层和绒毡层。绒毡层类型为腺质绒毡层。(2)小孢子母细胞减数分裂过程中的胞质分裂方式为同时型,小孢子四分体排列方式为左右对称型。(3)成熟花粉粒为2-细胞型,具有3个萌发孔。(4)子房具有1个胚珠,基生胎座,双珠被,厚珠心,倒生型;胚囊发育类型为蓼型。(5)雌配子体发育过程存在部分胚珠退化现象。3. T-11花粉为圆球形,其余为长球形。网状纹饰,除T-11网眼为穴状外,其余均为圆形或近圆形;T-491花粉表面着稀疏白色刺状颗粒,其余5个品种均密着白色刺状颗粒;T-491、黄连木、UCB-1和甘谷的花粉萌发孔为椭圆形,Peter花粉萌发孔为圆形,T-11花粉萌发孔为沟状;花粉粒大小顺序依次为:Peter>黄连木>T-491>T-11>甘谷>UCB-1。4.阿月浑子和黄连木花粉离体萌发适宜培养基为:蔗糖浓度为15%,硼酸浓度为100mg/L,适宜的培养温度25℃。最适宜阿月浑子和黄连木花粉萌发和花粉管生长的赤霉素(GA3)和2,4-D浓度分别为25mg/L和5mg/L,而萘乙酸(NAA)浓度为0.5mg/L适宜两种花粉萌发。当温度或浓度升高或降低时,花粉萌发率和花粉管长度在一定程度上均会受到抑制。贮藏后花粉内SOD、POD、CAT酶活性呈现先升高后降低的变化趋势。5.利用荧光显微镜观察发现,授粉后杂交组合柱头附着和萌发花粉数比对照组合少,且花粉萌发明显滞后,到达花柱和子房的花粉管数少于对照组合。杂交组合的柱头和花柱中有大量不规则胼胝质沉积,花粉管出现弯曲、膨大变粗等现象,授粉后24h,极少数花粉管进入子房,72h完成受精过程。杂交组合花粉管生长异常、胼胝质形成和沉积是引起杂交不亲和的主要原因。6.对阿月浑子和黄连木远缘杂交杂种胚败育时期进行了调查,建立了阿月浑子远缘杂种胚培养(抢救)技术体系。结果表明:杂交组合果实存在胚败育现象。果实内存在未完全退化的珠被,且珠柄上有褐变斑出现,坏死部分扩展到胚囊。阿月浑子杂种胚挽救的适宜胚龄为授粉后100~120d,杂种胚的发育始于授粉后80d,80d至100d是杂种胚败育的关键时期。适宜杂种胚培苗增殖的培养基为:DKW+2.0mg/L6-BA+0.05g/L IBA+0.3g/L LH+1.5g/L PVP,增殖系数为3.47,苗高为3.32cm。适宜杂种胚培苗生根的培养基为:1/2WPM+2.0mg/L IBA+0.05mg/L NAA,生根率为80%。7.对父本黄连木、母本阿月浑子和杂种F1代适应性初步分析认为杂种F1代抗病性和抗寒性优于两亲本。杂种F1代净光合速率日变化规律为明显的双峰曲线,有明显的午休现象,净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度和蒸腾速率及Fo、Fv/Fm和Fv/Fo均高于两亲本。人工低温处理过程中,三种树木枝条失水速率呈现逐渐升高的变化趋势;SOD、POD活性呈现先升高后降低的变化趋势,而MDA含量呈现升高的变化趋势;可溶性糖含量随处理温度的降低呈现升高的变化趋势。8.对阿月浑子和黄连木幼苗耐盐性的研究可知:(1)随着NaCl胁迫强度的增加,阿月浑子和黄连木叶片细胞膜透性、SOD活性呈逐渐升高的趋势;MDA含量呈先降低后升高的变化,而POD活性呈降低趋势;黄连木叶片中APX活性和阿月浑子叶片中GR活性呈先升高后降低趋势。(2)NaCl胁迫降低了叶绿素a、b含量,提高了阿月浑子a/b比值,而黄连木叶绿素a/b比值虽有下降,仍显著高于对照;净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)逐渐降低,NaCl浓度小于0.3%时,叶片净光合速率下降主要受气孔限制;NaCl浓度大于0.3%时,叶片净光合速率下降主要由非气孔因素限制。(3)随着NaCl浓度的升高,量子产额或能量分配比率(φPo、φo和φEo)、单位面积捕获的光能(TRO/CSO)、电子传递的量子产额(ETO/CSo)、单位面积的反应中心的数量(RC/CSO)逐渐降低,而单位面积光合机构的比活性参数(ABS/CSO)、热耗散的量子比率(φDo)逐渐增加。(4)随着盐胁迫程度的加重,阿月浑子和黄连木叶片中Na+含量、Na+/K+均呈升高趋势,而K+含量呈先升高后降低的变化。叶片中Ca、Mg、Fe、Zn含量均随着NaCl浓度的升高呈现逐渐降低的变化趋势。(5)NaCl浓度大于0.3%时,胞外电阻率r e、弛豫时间τ和弛豫时间分布系数均持续减小。
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