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本研究以miR-485为研究对象,通过在奶牛乳腺上皮细胞（bMECs）中添加反10、顺12共轭亚油酸（t10,c12-CLA）探究miR-485对bMECs的调控机制。本研究共分为三个实验:1.添加t10,c12-CLA通过miR-485对bMECs乳脂代谢的影响。转染miR-485后,对bMECs内甘油三酯（TGs）、胆固醇（CHOL）以及游离脂肪酸（NEFA）进行检测,结果显示:与短发夹RNA（shNC）对照组相比,miR-485 mimics可促进细胞内甘油三酯的合成,抑制胆固醇的生成,对游离脂肪酸的影响不显著（P>0.05）;将不同浓度梯度的t10,c12-CLA添加到bMECs中,分成五个处理组,浓度分别为0,50,100,150,200μmol/L,使用试剂盒测定细胞内甘油三酯、胆固醇以及游离脂肪酸的含量,结果显示:与对照组相比,添加100μmol/L t10,c12-CLA的细胞内甘油三酯的含量显著增加（P<0.05）,胆固醇的含量显著降低（P<0.05）,游离脂肪酸的含量没有显著性差异。进一步通过cck8试剂盒检测,结果显示:处理浓度为50μmol/L t10,c12-CLA可作为后续实验的最适添加量。2.MiR-485与候选靶基因DTX4和PDE10A的靶标关系验证。通过生物信息学方法分析并筛选出与脂代谢相关的候选靶基因DTX4和PDE10A等,通过对候选靶基因DTX4和PDE10A的3’UTR区进行预测,构建DTX4和PDE10A基因的双荧光素酶报告载体pmiR-RB-REPORT-DTX4-WT/mut/si和pmiR-RB-REPORT-PDE10A-WT/mut/si,并将其分别与miR-485 mimics共转染至奶牛乳腺上皮细胞中,结果显示:与对照组相比,当miR-485 mimics与重组载体共转染时,双荧光素酶活性的表达显著降低（P<0.05）,进一步验证miR-485与DTX4和PDE10A基因的靶向调节关系。通过实时荧光定量PCR和Western Blot检测miR-485及其候选靶基因DTX4和PDE10A在bMECs中mRNA和蛋白的表达量,结果表明:在奶牛乳腺上皮细胞中DTX4和PDE10A基因是miR-485的靶基因,因此,miR-485能够在转录和翻译水平上负向调控DTX4和PDE10A基因的表达。3.DTX4和PDE10A基因干扰载体的构建以及对乳脂代谢的调控作用。构建基因的干扰载体,探究功能基因DTX4和PDE10A在细胞水平上对乳脂代谢的作用机制。将目的基因的干扰载体转染至奶牛乳腺上皮细胞内,并利用实时荧光定量PCR方法检测DTX4和PDE10A基因在mRNA水平上的表达情况,测定细胞内甘油三酯、胆固醇的含量。结果显示:沉默DTX4和PDE10A基因后,bMECs内的甘油三酯含量极显著升高（P<0.01）,而细胞内胆固醇含量极显著降低（P<0.01）。研究结果表明DTX4和PDE10A基因可能通过调控不同的甘油三酯和胆固醇通路进而影响乳脂代谢进程。综上所述,本研究在添加t10,c12-CLA的条件下探究miR-485对bMECs的调控机制,以期完善乳脂代谢相关通路,为深入探讨miR-485及其靶基因在乳脂代谢中的调控作用和分子机制奠定基础。