【摘 要】
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目的:1.建立有效的真核表达体系。2.分泌表达出具有生物活性的HGF蛋白。方法:本研究首次利用p GAPZαA这一真核表达载体表达HGF蛋白。我们从gene bank上找到HGF全长片段,然后
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目的:1.建立有效的真核表达体系。2.分泌表达出具有生物活性的HGF蛋白。方法:本研究首次利用p GAPZαA这一真核表达载体表达HGF蛋白。我们从gene bank上找到HGF全长片段,然后根据真核表达偏爱密码子将其合成。为得到二级结构的HGF蛋白,我们在494位氨基酸Arg和495位氨基酸Val间添加了肠激酶序列。将HGF和p GAPZαA质粒双酶切后行连接转化,构建穿梭载体p GAPZαA-HGF,测序后将穿梭载体进行线性化,然后电转化入毕赤酵母GS115进行表达,分别在24h,48h,72h,96h取样。将得到的蛋白行亲和层析纯化,然后行Western Blot检测。最后分离小鼠原代肝细胞,采用MTT法检测HGF蛋白的生物学活性。结果:成功构建了p GAPZαA-HGF穿梭质粒,Western Blot检测显示80k Da左右有阳性条带,HGF蛋白成功表达,在48h时表达量较好,浓度为16.6mg/L,并且得到的HGF蛋白具有生物学活性。结论:建立了有效的真核表达体系,分泌表达出具有生物活性的HGF蛋白,为真核表达HGF蛋白提供了实验依据,为后续大量表达HGF蛋白提供了可行性。
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作者简介：王开阳（1998.10-），男，汉族，山东人，山东省济宁市兖州区第一中学高三在读。 生活是繁忙的，也是枯燥的。在人生的旅途中，每个人似乎都是冲着“相遇”而奔跑的。在这奔波当中，偶然地回首，会发现如果当初与之点点头，那个人在今天已经成为了你的挚友；如果当初找他攀谈，那个人在今天已经成为了你的恋人；如果当初伸出了手，那个人将会成为你的贵人……每一种可能性或许都会无穷大地改變你的命运，如今回
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