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研究背景:c-myc基因是调控细胞增殖与分化的癌基因,在急性白血病细胞株及急性白血病、恶性淋巴瘤患者细胞中均出现高表达,是影响这些恶性肿瘤发生、发展的重要基因之一。多数肿瘤中c-myc基因高表达的原因被认为是c-myc的启动子发生突变,导致转录发生改变,另外一种原因可能是因为c-myc mRNA的3’或5’端非翻译区突变导致c-myc的mRNA稳定性增高。缺乏下调c-myc表达在许多肿瘤的发生发展中扮演非常重要的角色。RNA干扰(RNA interference)是许多生物体内的一种保守机制。RNAi是指一种双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因的表达使其沉默的过程,是一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGS)。其基本原理是dsRNA通过RNaseⅢ内切酶Dicer的作用产生21～23 nt有活性的小干扰RNA(short interfering RNA, siRNA),然后在细胞内形成RNA诱导沉默复合体(RNA induced silence complex,RISC),RISC根据碱基互补以siRNA为模板特异地识别其同源基因mRNA,并对其进行递进式剪切,诱导序列特异性mRNA的降解,从而抑制基因表达。RNAi是新近发展起来的一种基因功能研究的新方法[1,2],因而得到迅速发展,目前已广泛应用于功能基因组和基因治疗的研究[3,4]。本研究选择高表达c-myc的HL-60细胞株[5]作为研究对象,观察c-myc siRNA对其增殖、凋亡的影响。目的:探讨c-myc小干扰RNA对急性粒细胞白血病细胞株HL-60增殖、凋亡、基因、蛋白的影响。探寻白血病基因治疗的新方法。方法:针对c-myc mRNA的第1762-1782靶位点设计siRNA,利用T7 RNA聚合酶和双链DNA模板采取体外转录法合成。合成的c-myc小干扰RNA,经Lipofectamine 2000脂质体转染入HL-60细胞,观察形态学变化,应用四唑盐(MTT)法绘制细胞生长曲线,细胞集落培养观察c-myc siRNA对HL-60细胞增殖的影响;应用流式细胞术和DNA片段化分析细胞的调亡,RT-PCR及Western blot检测c-myc siRNA作用前后c-myc、hTERT基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果:c-myc siRNA能明显抑制HL-60细胞增殖,半数抑制浓度IC50约为150nM。(1) MTT法检测siRNA对HL-60细胞生长有抑制作用,对克隆形成有明显的抑制作用。(2) siRNA可引起HL-60细胞的c-myc、hTERT的mRNA水平的降低。(3) siRNA可引起HL-60细胞的凋亡,用流式细胞仪、DNA片段分析均检测出细胞凋亡。(4) siRNA能引起HL-60细胞的c-myc、hTERT蛋白表达下降。结论:c-myc siRNA对HL-60细胞有明显的抑制作用,可抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。