恩施碎米荠是一种新的超富集硒的植物种质,对其含硒蛋白的分离纯化鲜见报道。本文对恩施碎米荠的含硒蛋白的提取分离、初步纯化及其体外杭氧化活性进行了系统研究。论文的主要工作归纳如下:(1)首次对恩施碎米荠的基础营养成分进行系统分析。结果表明恩施碎米含硒量丰富,水分,灰分,粗脂肪,粗蛋白,膳食纤维含量可观,氨基酸种类齐全,是一种高效、优良的天然有机补硒源,为后续实验提供了基础数据和必要的理论指导。(2)对恩施碎米荠的不同溶解性蛋白质进行了分离提取,并考察了其体外抗氧化活性。研究表明恩施碎米荠中最主要的蛋白组分为水溶蛋白质,占总蛋白质的37.57%,其次是碱溶蛋白质,占总蛋白质的35.75%。考察不同溶解性蛋白质体外抗氧化活性,发现碱溶蛋白质有最强的总抗氧化能力、羟自由基清除能力和还原力,水溶蛋白质超氧阴离子清除能力最强。此外,对不同溶解性蛋白质的蛋白结合硒进行了测定,发现碱溶蛋白质中硒结合蛋白含量最高,说明恩施碎米荠的碱溶蛋白是提取纯化含硒蛋白的理想材料。(3)首次系统地探讨了恩施碎米荠含硒碱溶蛋白的提取工艺并对其进行了优化。考察了pH、提取时间、提取温度、料液比和提取次数等因素对恩施碎米荠含硒碱溶蛋白提取率的影响,利用L9(84)正交试验确定恩施碎米荠含硒碱溶蛋白的提取的最佳条件组合为D7A4B6C5,即pH=10,提取时间3 h,提取温度40℃,料液比1:40,在此基础上得到的恩施碎米荠碱溶蛋白质提取率为48.24%。利用Box-Behnken的中心试验对恩施碎米荠碱溶蛋白质的提取进行了p H、提取时间、提取温度、料液比4个因素的响应面优化分析。确定恩施碎米荠碱溶蛋白质的提取的最佳条件组合为pH为11,提取时间为3.5 h,提取温度为40℃,料液比为1:40,在此基础上得到的恩施碎米荠碱溶蛋白质提取率为49.68%。恩施碎米荠含硒碱溶蛋白质的提取工艺的揭示为其含硒碱溶蛋白质的提取提供了理论依据,为恩施碎米荠的进一步开发应用奠定了基础。(4)利用Sephadex G-100柱层析和DEAE-Sephcrose-FF柱层析联用的方法对含硒碱溶蛋白进行进一步提取纯化,得到了高浓度的目的蛋白组分,并测定其体外抗氧化活性。实验结果表明高浓度蛋白组分的等电点为4.8左右,分子量为17~25 kDa。采用Sephadex G-100柱层析对恩施碎米荠碱溶蛋白提取液进行分离,得到4个蛋白洗脱峰,其中峰Ⅰ硒含量与蛋白质含量最高。硒浓度为2.52μg/mL,蛋白质浓度为7.85 mg/mL。采用DEAE-Sephcrose-FF柱层析对Sephadex G-100峰Ⅰ进行继续分离,得到4个蛋白洗脱峰,其中峰c硒含量与蛋白质含量最高。硒浓度为1.29μg/mL,蛋白质浓度为3.49 mg/mL。测定DEAE-Sephcrose-FF各洗脱峰体外抗氧化活性,其中峰c的体外抗氧化活性,羟自由基清除能力、抗超氧阴离子清除能力、抗DPPH自由基清除能力均显著高于峰a、峰b、峰d。恩施碎米荠含硒蛋白的分离纯化为含硒蛋白二级结构的解析提供了必要条件。