论文部分内容阅读
第一部分异丙酚对缺氧复氧损伤人肝L02细胞的保护作用及机制研究目的探讨异丙酚对缺氧复氧损伤人肝L02细胞的作用及机制。方法1.将培养的人肝L02细胞分为正常对照组（C组）、单纯缺氧复氧组（O组）、异丙酚预给药组（Y组）和后给药组（Yh组）。C组正常培养，O、Y和Yh组缺糖缺氧5h后正常培养12h，培养结束后使用MTT比色法测定细胞活力。2.使用流式细胞仪检测正常对照组（C组）、单纯缺氧复氧组（O组）及异丙酚组（Y组）细胞凋亡情况、比色法测定细胞培养液LDH活力。3.使用专用共聚焦小皿培养细胞，分组同2，荧光染色后使用激光共聚焦显微镜观察三组不同处理后的L02细胞内钙浓度动态变化。4.使用γ-井型计数仪测定单纯缺糖缺氧组(O组)和异丙酚预给药组（Y组）在细胞缺糖缺氧1h内的18F-FDG摄取率变化。结果1.10~80ug/ml终浓度的异丙酚预给药和后给药均可提高缺氧复氧后的L02细胞存活率（P<0.05）；使用相同浓度异丙酚预给药与后给药对缺氧复氧损伤L02细胞的存活率影响无明显区别（P>0.05）。2.10~80ug/ml终浓度的异丙酚可显著降低缺氧复氧后L02细胞的凋亡率（P≤0.05）；10~80ug/ml终浓度内4个亚组之间的细胞凋亡率无明显差异（P>0.05）。3.10~80ug/ml终浓度的异丙酚可显著降低缺氧复氧L02细胞的LDH活力（P<0.01），当异丙酚终浓度为30ug/ml时，其LDH释放量显著低于其余各异丙酚组（P<0.05）。4.L02细胞缺糖缺氧后钙内流明显增加，使用80ug/ml异丙酚可以显著延迟缺糖缺氧L02细胞的钙内流时间（49.5±3.1)s（P<0.05）。5.L02细胞缺糖缺氧1h内,随着时间延长18F-FDG摄取率逐渐增加，并于50min达高峰，到60min时显著下降，其中在40~60min时间段内，异丙酚组的18F-FDG摄取率显著低于单纯缺氧复氧组（P<0.05）。结论异丙酚预给药和后给药均能提高缺氧复氧损伤L02肝细胞的存活率，异丙酚对缺氧复氧损伤L02细胞的保护作用机制可能与减轻氧化应激损伤和钙超载、降低缺氧期细胞代谢率从而抑制细胞凋亡有关。第二部分瑞芬太尼对缺氧复氧损伤人肝L02细胞的影响及机制研究目的探讨瑞芬太尼对缺氧复氧损伤人肝L02细胞的作用及机制。方法1.将培养的L02细胞分为正常对照组（C组）、单纯缺氧复氧组（O组）、瑞芬太尼预给药组（R组）和后给药组（Rh组）。C组正常培养，O、R、Rh三组缺糖缺氧处理5h后恢复正常条件培养12h，培养结束后使用MTT比色法测定细胞活力。2.使用流式细胞仪检测正常对照组（C组）、单纯缺氧复氧组（O组）、瑞芬太尼组（R组）细胞凋亡情况,比色法测定三组细胞培养液LDH活力。3.荧光染色后使用激光共聚焦显微镜观察三组不同处理的L02细胞内钙浓度动态变化。4.双抗标记三组不同处理的L02细胞后使用流式细胞技术检测Bcl-2、Bax表达情况。结果1.5~40ng/ml终浓度的瑞芬太尼预给药和后给药均可提高缺氧复氧后L02细胞的存活率（P<0.05）；相同浓度瑞芬太尼预给药与后给药对缺氧复氧损伤L02细胞的存活率影响无明显区别（P>0.05）。2.5~40ng/ml终浓度的瑞芬太尼可显著降低缺氧复氧后L02细胞的凋亡率（P<0.05）,浓度内不同浓度亚组之间的细胞凋亡率无区别（P>0.05）。3.5~30ng/ml终浓度的瑞芬太尼均可显著降低缺氧复氧后L02细胞的LDH活力（P≤0.05），5~20ng/ml各亚组之间的LDH活力无统计学差异（P>0.05）。4.40ng/ml瑞芬太尼可以延迟缺氧复氧损伤L02细胞的钙内流时间（48.5±2.9)s（P<0.05）。5.瑞芬太尼组Bcl-2表达高于单纯缺氧复氧组、Bax表达则低于单纯缺氧复氧组（P<0.05）。结论.瑞芬太尼预给药和后给药均能提高缺氧复氧损伤L02肝细胞的存活率，瑞芬太尼的保护作用机制可能与其通过减轻氧化应激损伤和钙超载、上调Bcl-2蛋白表达的同时下调Bax蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关。