目的:探查Smad4基因在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其启动子甲基化情况，探讨Smad4基因表达异常与甲状腺乳头状癌发生发展的关系及其生物学意义。　　材料与方法:　　1、材料:选自台州学院附属台州市立医院肿瘤外科2013年1月至2013年8月期间收治甲状腺乳头状癌手术病例标本共40例，分为卖验组和对照组。其中实验组甲状腺乳头状癌20例，男性3例，女性17例，年龄21-59岁，平均44.6岁，根据患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况、临床分期等因素分为亚组。实验组20例病例中，其中年龄≥45岁14例，＜45岁6例;肿瘤直径＞1cm的17例，肿瘤直径≤1cm的3例;伴淋巴结转移6例，无淋巴结转移14例。对照组为结节性甲状腺肿手术中腺肿周围大体观相对正常组织标本，其中男性5例，女性15例，年龄23-65岁，平均42.3岁。所取40例标本组织体积约6×6mm大小，其中1/2置于4％福尔马林溶液中固定，用于免疫组织化学检测;另1/2置-80℃低温冰箱中保存，用于Real-timePCR、蛋白质印迹及甲基化特异性PCR检测Smad4基因的表达。所有标本组织选取均经患者同意，术前未行放疗或化疗治疗，术后病理证实。　　2、方法　　2.1 Immunohistochemistry(免疫组织化学，IHC):检测Smad4蛋白在甲状腺乳头状癌组织及正常甲状腺组织中的表达;检测TGF-β1蛋白在甲状腺乳头状癌组织及正常甲状腺组织中的表达;数据统计用卡方检验比较组间计数资料，P＜0.05时认为差异有统计学意义。　　2.2 Real-time PCR(实时定量PCR):检测Smad4基因mRNA在甲状腺乳头状癌及对照组组中的表达情况并进行对比分析，组间计数资料比较使用卡方检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。　　2.3 Western-blot（蛋白质印迹法）:检测Smad4蛋白在甲状腺乳头状癌和正常甲状腺组织中的表达情况，组间采用t检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。　　2.4 MSP(甲基化特异性PCR):检测甲状腺乳头状癌和对照组组织中Smad4基因的启动子甲基化情况并进行对比分析，组间计数资料比较采用卡方检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。　　结果:　　1、Immunohistochemistry(IHC):20例甲状腺乳头状癌组织中有7例Smad4蛋白表达呈阳性，对照组20例标本中其中18例Smad4蛋白表达呈阳性，卡方检验比较两组数据，P=0.0010，差异具统计学意义(P＜0.05); TGF-β1蛋白在甲状腺乳头状癌组织中阳性表达率为85.0％(17/20)，而在对照组中的阳性表达率为50.0％(10/20)，组间计数使用卡方检验，P=0.0428，差异具统计学意义(P＜0.05)。比较肿瘤组中Smad4蛋白在年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移等亚组间的表达，用Fishers Exact方法检验，P＞0.05，无统计学意义。　　2、Real-time PCR:采用相对定量2-△△Ct方法处理Smad4基因mRNA在甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织中的表达结果，结果显示Smad4基因在甲状腺乳头状癌组织中的表达平均为对照组的0.3476±0.0061，呈抑癌作用。　　3、Western-blot:每个标本组织重复实验3次以上，用Imag J软件测定条带灰度值，结果显示甲状腺乳头状癌中Smad4蛋白条带平均灰度值为0.3523±0.0121，正常对照组中Smad4蛋白条带平均灰度值为0.7218±0.0067，Smad4蛋白在甲状腺乳头状癌组织中表达较对照组中表达低。　　4、甲基化特异性PCR:20例甲状腺乳头状癌组织中Smad4基因启动子甲基化率为35％(7/20)，对照组基因启动子甲基化率为5％(1/20)，组间计数用卡方检验比较，P=0.0481，差异具有统计学意义。　　结论:　　1、免疫组织化学、Western-blot结果提示:Smad4蛋白在甲状腺乳头状癌中表达下调;Real-time PCR结果提示:Smad4基因mRNA在甲状腺乳头状癌中表达下调。Smad4基因在甲状腺乳头状癌中起抑癌作用。　　2、免疫组织化学结果提示TGF-β1蛋白在甲状腺癌中表达上调，与Smad4蛋白的表达呈负相关。　　3、甲基化特异性PCR结果提示甲状腺乳头状癌中Smad4基因低表达与启动子区的甲基化有关。