本研究对广西奶水牛88份乳样进行病原菌分离鉴定,根据引起奶水牛乳房炎的主要致病菌种类建立多重PCR快速诊断方法,并对该检测方法进行优化和临床检测评价。实验内容:1、通过对88份奶样进行细菌分离鉴定,从56份奶样中分离出112株病原菌,包括葡萄球菌47株,占41.9%;链球菌25株,占22.3%;肠杆菌21株,占18.8%;真菌12株,占10.8%;其它细菌7株,占6.2%。2、根据引起水牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌nuc基因、大肠杆菌rrnB基因,无乳链球菌ef-tu基因,表皮葡萄球菌se2313基因序列设计选择4对特异性引物,建立并优化同时检测这4种病原菌的4重PCR快速诊断方法。实验结果表明:1、引起水牛乳房炎的主要致病菌为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌,还有部分真菌感染;感染主要以混合感染为主,56份感染奶样中有40个为2种及以上的多种致病菌混合感染,占71.4%。2、PCR产物进行电泳,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、无乳链球菌分别在722bp、279bp、581bp和197bp处扩增出相应目的条带,且无其它非特异性产物,实验与临床检测结果证明该方法敏感性好,特异性高,与传统细菌分离检测方法相比,既保证结果准确,又大幅度缩短检测时间,提高检测效率。