诃子及茜草制诃子多糖对免疫抑制中国黄羽鹌鹑脾脏形态结构及其免疫功能的影响

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诃子(Terminalia chebula Retz,TC)是使君子科植物诃子或者绒毛诃子的干燥成熟的果实。作为诃子炮制品的茜草制诃子(Rubia cordifolia L.processed Terminalia chebula Retz,RTC)是TC经过茜草灰及麦酒炮制后得到的平息方剂。目前关于诃子多糖(Terminalia chebula Retz polysaccharide,TCP)及茜草制诃子多糖(Rubia cordifolia L.processed Terminalia chebula Retz polysaccharide,RTCP)对脾脏形态结构及免疫功能的研究未见报道。本实验以TC及RTC为研究对象,对其活性成份——多糖进行提取研究。并选用21日龄中国黄羽鹌鹑,随机分为模型组、空白组、TCP组、RTCP组。31日龄后,用光镜、荧光定量PCR等方法研究TCP及RTCP对免疫抑制中国黄羽鹌鹑脾脏形态结构与免疫功能的影响,旨在为扩展TC及RTC的应用提供理论依据。其结果如下:1.以TCP及RTCP的提取率为筛选指标,通过单因素实验的筛选再结合正交实验对纤维素酶提法及索氏提取法中对TCP及RTCP影响的主要因素进行研究。(1)TCP最优的纤维素酶提法提取工艺为:1:50的料液比,50℃的提取温度,60 min的提取时间,1.8%的加酶量,在此条件TCP的最大的提取率达到2.92%。而RTCP最优的纤维素酶提法提取工艺为:1:40的料液比,40℃的提取温度,90 min的提取时间,1.8%的加酶量,在此条件RTCP的最大的提取率达到3.29%。(2)TCP最优的索氏提取法提取工艺为:1:40的料液比,4 h的提取时间,5次的提取次数,溶剂中乙醇的含量为0%,在此条件TCP最大的提取率达到4.63%。而RTCP最优的索氏提取法提取工艺为:1:40的料液比,4 h的提取时间,5次的提取次数,溶剂中乙醇的含量为0%,在此条件RTCP的最大的提取率达到4.76%。以上两种提取方法结果显示,在相同提取方法下RTCP提取率优于TCP,为进一步探索同一提取方法下,所提取的TCP及RTCP的免疫作用是否存在差异,故随后动物实验将采用索氏提取法所得到的TCP与RTCP进行后续实验。2.运用HE、TUNEL染色及荧光定量PCR等实验方法,对索氏法提取的TCP及RTCP的免疫作用进行比较。研究TCP及RTCP对免疫抑制中国黄羽鹌鹑脾脏组织形态结构的改变、细胞凋亡变化及免疫相关因子T-bet及GATA-3的变化。结果如下:(1)组织学结果显示:模型组脾脏萎缩、脾小结数目减少、面积变小,其中脾小结数目极显著(P<0.01)低于空白组。TCP组与RTCP组相较于模型组脾脏体积变大、脾小结数目与面积均增加,其中RTCP组脾小结面积极显著(P<0.01)大于模型组,其余各数据与空白组无显著差异性(P>0.05)。(2)TUNEL染色结果显示:模型组、空白组、TCP组与RTCP组TUNEL染色阳性细胞在白髓及红髓均有分布,但主要分布于白髓,阳性细胞细胞核为棕黄色。模型组TUNEL阳性细胞明显分布多于空白组、TCP组及RTCP组。显微定量分析表明模型组TUNEL阳性细胞最多,极显著(P<0.01)高于空白组,显著(P<0.05)的高于TCP组及RTCP组。但TCP组及RTCP组TUNEL阳性细胞数目均极显著(P<0.01)高于空白组。(3)荧光定量PCR结果显示:RTCP组GATA-3基因的表达极显著高于模型组和TCP组(P<0.01),空白组显著(P<0.05)高于模型组与TCP组。而T-bet基因的表达各组间无显著差异性(P>0.05)。结果显示,TCP与RTCP均能改善CTX所致的免疫抑制中国黄羽鹌鹑脾脏的形态结构及免疫功能,但经过炮制的RTCP相较于TCP更能提高免疫抑制中国黄羽鹌鹑脾脏的免疫功能,有利于调节脾脏的免疫状况。
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